Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
der im ersten Schritt mit IgG (62,5 pmol/ml) inkubiert wurde, wurde anschließend im zweiten
Schritt mit AP-anti human IgG (Fc)-Antikörper inkubiert, um die Bindung von IgG an E. coli-
IPSE nachzuweisen. Auf diesem Streifen (Nr. 1) in der Abbildung 4.2 ist deutlich zu
erkennen, dass das IgG an das E. coli-IPSE auf der Membran gebunden hat. Die
Quervernetzung durch das IPSE-Antiserum konnte auch hier wieder sichtbar gemacht
werden, es ist eine starke Anfärbung der Dots zu erkennen. Zusätzlich zeigte sich diesmal
aber auch deutlich eine Bindung durch IgG und zwar in allen vier gewählten Konzentrationen.
Allerdings ist aber auch wieder sehr deutlich die Anfärbung in der Negativkontrolle, mit
TBST-Puffer in der Mitte, zu erkennen. Sie ist ebenso stark wie die Färbung, die durch die
Quervernetzung durch IgG oder das IPSE-Antiserum hervorgerufen wird.
Abbildung 4.2: Quervernetzung von E. coli-IPSE durch IgG im Sandwich-Blot. E. coli-IPSE wurde in einer
Konzentrationsreihe (pmol/Dot) auf die Nitrozellulosemembran gedottet. Erster Inkubationsschritt: IgG (62,5
pmol/ml; 125 pmol/ml; 250 pmol/ml; 500 pmol/ml), anti-IPSE-Antiserum (anti-IPSE) als Positivkontrolle oder
TBST-Puffer als Negativkontrolle bzw. SAVAP-Kontrolle. Zweiter Inkubationsschritt: biotinyliertes E. coli-
IPSE (50 pmo/ml); TBST-Puffer (SAVAP-Kontrolle). Die Bindung wurde über SAVAP nachgewiesen. Erster
Streifen zeigt den Bindungsnachweis von IgG (62,5 pmol/ml) mit AP-anti human IgG (Fc)-Antikörper (AP-anti-
IgG).
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