Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
Abbildung 4.1: Vergleich der Bindungsintensität von E. coli-IPSE an IgG, IgG-Fab und IgG-Fc im Dot
Blot. IgG, IgG-Fab und IgG-Fc wurden in einer Konzentrationsreihe (pmol/Dot) auf Nitrozellulosemembran
gedottet und mit E. coli-IPSE (50 pmol/ml) inkubiert. Die Bindung wurde mit monoklonalem anti-IPSE-
Antikörper als Primärantikörper und AP-anti-Maus-Antikörper als Sekundärantikörper nachgewiesen.
4.2 Quervernetzung von IgG durch IPSE im Sandwich-Blot
Erste Biacore-Untersuchungen von Silke Blindow (2004) zeigen, dass mindestens zwei
Moleküle IPSE an ein Molekül Immunglobulin binden können. Dieser Befund sollte mit Hilfe
von Sandwich-Blot-Experimenten weiter untersucht werden und gezeigt werden, dass ein
Molekül IPSE an zwei Moleküle Immunglobulin in einer Art Quervernetzung binden kann.
Diese Frage wurde am Beispiel von IgG untersucht, da dieses Immunglobulin leichter
verfügbar ist und IPSE, wie unter 4.1 gezeigt, an IgG bindet.
4.2.1 Quervernetzung von E. coli-IPSE durch IgG
Für die Untersuchung der Quervernetzung von E. coli-IPSE durch IgG wurde E. coli-IPSE in
einer Konzentrationsreihe (330 – 0,1 pmol/Dot) auf die Membran gedottet und die Streifen
dann in einer 8-Kanalschale entweder mit IgG in unterschiedlichen Konzentrationen (62,5
pmol/ml, 125 pmol/ml, 250 pmol/ml und 500 pmol/ml) oder mit TBST als Negativkontrolle
oder mit anti-IPSE-Antiserum (942Y; 1:1000) als Positivkontrolle inkubiert. Im zweiten
Schritt wurde dann wieder mit biotinyliertem E. coli-IPSE inkubiert (50 pmol/ml) und die
Bindung über SAVAP (1:15000) nachgewiesen (s. Abbildung 4.2). Ein zusätzlicher Streifen,
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