Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

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In der Einleitung wurde erwähnt, dass IPSE identisch mit dem Molekül alpha-1 ist und daher
IPSE/alpha-1 genannt wird. Im Folgenden dieser Arbeit wird zur Vereinfachung IPSE/alpha-1
stets nur „IPSE“ genannt. Dies bezieht sich sowohl auf das natürliche IPSE als auch auf die
rekombinanten Moleküle E. coli-IPSE und HEK-IPSE.
4.1 Untersuchung der Bindungsstärke von E. coli-IPSE an IgG, IgG-Fab
und IgG-Fc im Dot Blot
Schon früher wurde herausgefunden, dass die IL-4-Freisetzung aus Basophilen durch IPSE
IgE-vermittelt ist (Haisch et al., 2001; Schramm et al., 2003). Neben der Bindung an IgE
konnte Silke Blindow (2004) in ihrer Arbeit zeigen, dass E. coli-IPSE auch an IgG, IgA und
IgM bindet, wenn auch mit geringerer Affinität. Ebenfalls konnte mit HEK-IPSE die Bindung
an IgE und IgG bestätigt werden (Wodrich, 2006). Zusätzlich zeigten Ergebnisse aus Western
Blot- und Biacore-Experimenten von Silke Blindow, dass E. coli-IPSE neben dem
Gesamtmolekül auch an IgG-Fragmente (IgG-F(ab) 2 , IgG-Fab und IgG-Fc) bindet. Über die
Bindungsstärke von IPSE an IgG und seine Fragmente konnte aber keine Aussage getroffen
werden. Deshalb wurde die Bindungsintensität von E. coli-IPSE vergleichend an IgG, IgG-
Fab und IgG-Fc mittels eines Dot Blots weiter untersucht. Hierfür wurden IgG, IgG-Fab und
IgG-Fc in einer Konzentrationsreihe (330 - 0,1 pmol/Dot) auf eine Nitrozellulosemembran
gebracht und nach Blockierung der Membran mit E. coli-IPSE (50 pmol/ml) inkubiert. Die
Bindung wurde dann durch monoklonalen anti-IPSE-Antikörper (Klon 74-4B7, 1:50) und
über einen AP-konjugierten anti-Maus-Antikörper nachgewiesen. Wie in Abbildung 4.1 zu
erkennen, ist eine Bindung von E. coli-IPSE sowohl an das Gesamtmolekül IgG als auch an
dessen Fragmente IgG-Fab und IgG-Fc sichtbar. Die Bindung an das Gesamtmolekül IgG
zeigt hierbei das stärkste Signal. Weiterhin ist zu erkennen, dass die Bindung an IgG-Fab ein
stärkeres Signal ergibt als die Bindung an IgG-Fc, was auf eine stärkere Bindung hinweist.
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