Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Methoden
2,7 und einer Laufgeschwindigkeit von 1 ml/min. Es wurden wieder 1 ml Fraktionen
gesammelt. Das Proteinprofil wurde während der gesamten Läufe über einen UV-Monitor bei
280 nm aufgezeichnet. Die gesammelten Fraktionen wurden nachträglich in einer SDS-PAGE
(s. 3.3) mit anschließender Silberfärbung (s. 3.4) untersucht.
3.10 Dynamische Lichtstreumessungen (DLS) mit HEK-IPSE
Die dynamische Lichtstreuung oder Photonen-Korrelationsspektroskopie ermöglicht die
Bestimmung der Größenverteilung von Partikeln in Lösung. Die Untersuchung zur Größe von
HEK-IPSE wurde im Institut für Biochemie an der Universität zu Lübeck in der
Arbeitsgruppe Prof. Dr. Hilgenfeld von Herrn Dr. Jeroen R. Mesters durchgeführt. Hierfür
wurde das Gerät „Spectroscatter 201“ (Firma RiNA GmbH) verwendet.
Bei dieser Methode wird die Streuung von Laserlicht durch die Partikel ausgenutzt. Partikel in
Lösung unterliegen einer Brownschen Molekularbewegung, wobei sich kleinere Partikel
schneller bewegen als größere. Aus diesem Grund ändert sich die Lichtstreuungsintensität
permanent. Bei größeren Partikeln bleibt die gemessene Streurate für längere Zeit konstant,
während sie sich für kleinere Partikel in kürzerer Zeit wieder ändert. Aufgrund dieser
Fluktuationsrate kann auf die Größe bzw. auf den hydrodynamischen Radius geschlossen
werden. Der hydrodynamische Radius, auch „Stokes Radius“ genannt, beschreibt den Radius
einer hypothetischen Kugel, die den gleichen Diffusionskoeffizienten besitzt wie das
beschriebene Partikel. Dieser hydrodynamische Radius wird über die Stokes-Einstein-
Beziehung definiert:
D = k B
D = Diffusionskonstante
k B = Boltzmannkonstante
T = Temperatur
ät der Lösung
r = Hydrodynamischer Radius
Dieses Prinzip wurde in dieser Arbeit zur Untersuchung der Aggregation von HEK-IPSE in
PBS-Puffer eingesetzt. Für die Untersuchung wurde die Probe sowohl nicht-zentrifugiert als
auch zentrifugiert (10 min; 13000 rpm) verwendet. Zusätzlich wurde ein
Basophilenstimulationstest zur IL-4-Freisetzung durchgeführt (s. 3.12), wobei die Probe
ebenfalls nicht-zentrifugiert und zentrifugiert untersucht wurde.
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