Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Einleitung
1.9 Ziel dieser Arbeit
Wie beschrieben, wurde aus den Eiern des Trematoden Schistosoma mansoni ein
Triggerfaktor (IPSE/alpha-1) isoliert, der Basophile zur Freisetzung von IL-4 aktiviert und
daher mit großer Wahrscheinlichkeit eine Rolle bei der Entstehung oder Verstärkung der
Wurm-induzierten Th2-Antwort spielt. Frühere Bindungsstudien mit IgG und IgE weisen
daraufhin, dass IPSE/alpha-1 Immunglobuline wider Erwarten nicht quervernetzen kann und
somit Basophile nicht über den allgemein akzeptierten Mechanismus der Quervernetzung von
IgE aktiviert.
Die vorliegende Arbeit hat zum Ziel, den Mechanismus der Basophilenaktivierung durch
IPSE/alpha-1 weiter zu charakterisieren, insbesondere in Bezug auf die
Bindungsstöchiometrie von IPSE/alpha-1 und Immunglobulin, die sich grundsätzlich
unterscheiden sollte, je nachdem ob eine Quervernetzung vorliegt oder nicht.
- Um die Frage zu klären, an welchen Abschnitt des Immunglobulinmoleküls
IPSE/alpha-1 präferentiell bindet, sollte mittels Dot-Blot-Analyse die Intensität seiner
Bindung an das komplette IgG-Molekül und an dessen Fab- und Fc-Fragmente
miteinander verglichen werden.
- Hinsichtlich der Fragen der Quervernetzung, Bindungsstöchiometrie und
Bindungsaffinität zwischen IPSE/alpha-1 und Immunglobulinen sollte die Art der
Komplexbildung zwischen IPSE/alpha-1 und Immunglobulinen in Lösung über
Größenausschlusschromatographie und über chemische Quervernetzung präformierter
Komplexe mit anschließender Darstellung in der SDS-PAGE charakterisiert werden.
- Eine weitere Charakterisierung der Komplexbildung zwischen IPSE/alpha-1 und
Immunglobulinen sollte mit jeweils einem Festphasen-gekoppelten Bindungspartner
im Sandwich-Blot und mittels Affinitätschromatographie erfolgen.
23