Herbsttagung Programm & Abstracts - Deutsche Gesellschaft für ...

Untersuchungen zur Rolle von Lungenfibroblasten bei der Alveolarisierung
Friederike Klein 1 , Werner Seeger 1,2 , Annegret Wilde 3 , Botond Roska 4 , William D. Richardson 5 , Robert
Voswinckel 1,2
1 Max-Planck-Institut für Herz- und Lungenforschung, Bad Nauheim, Deutschland; 2 Abteilung für
Innere Medizin, Universitätsklinikum Gießen, Deutschland; 3 Institut für Mikro- und Molekularbiologie,
Justus-Liebig Universität Gießen, Deutschland, 4 Friedrich Miescher Institut für biomedizinische
Forschung, Basel, Schweiz, 5 Wolfson Institute for Biomedical Research, University College London,
UK
Einleitung: Alveolären Fibroblasten kommt eine wichtige Rolle bei der Alveolarisierung zu, da einem
PDGFRα Knockout sowohl die Myofibroblastendifferenzierung als auch die sekundäre Septierung
fehlen (Boström et al., 1996). Lipofibroblasten scheinen ebenso wichtig für die Septierung zu sein, da
sie währenddessen sehr häufig vorhanden sind, nach der Septierung aber wieder deutlich weniger
werden. Es ist bislang nicht bekannt ob PDGFRα exprimierende Zellen die Vorläufer für beide
Fibroblastentypen sind und ob eine Transdifferenzierung untereinander stattfindet.
Deshalb ist Ziel dieser Arbeit die einzelnen Fibroblastentypen während der Entwicklung und ihre Rolle
bei der regenerativen Septierung im Erwachsenenalter zu untersuchen.
Methoden: Zur Linienverfolgung wurden Cre-Reportermäuse, welche nach Rekombination von einem
roten Fluoreszenzfarbstoff in einen Grünen umschalten (mTomato/mGFP) mit konstitutiven
PDGFRαCre oder konditionellen PDGFRαCreER Mäusen verkreuzt. Zur Identifizierung der aktiven
PDGFRα Expression wurden PDGFRα-GFP knock-in Mäuse verwendet. Das Lungengewebe wurde
zu verschiedenen Zeitpunkten der Entwicklung durch Immunfluoreszenzfärbungen analysiert. Als
Marker für Lipofibroblasten wurde ADRP (adipocyte differentiation related protein) verwendet,
Myofibroblasten wurden durch Ko-Färbung mit α-smooth muscle actin (αSMA) identifiziert.
Ergebnisse: Immunfluoreszenzfärbungen zeigten eine Ko-Expression von PDGFRα und αSMA
sowohl in den Bronchien, als auch im Alveolarraum. ADRP ko-lokalisiert mit dem Marker der
Vorläufer, jedoch nicht in allen Zellen.
Das Expressionsmuster konnte sowohl mit den konstitutiven PDGFRαCre Mäusen als auch mit den
konditionellen PDGFRαCreER Mäuse bestätigt werden.
Diskussion: Mithilfe der PDGFRα-GFP Mäuse konnte gezeigt werden, dass sich PDGFRα
exprimierende Vorläuferzellen sowohl in Lipo- als auch in Myofibrobalsten differenzieren. Die
konstitutive PDGFRαCre Maus belegte die Beschränkung von PDGFRα auf die glatten Muskelzellen
der Bronchien und alveoläre Fibroblasten. Die Linienverfolgung mithilfe der konditionellen
PDGFRαCreER Maus bestätigte, dass sich postnatale PDGFRα Zellen in beide Fibroblastentypen
differenzieren können.
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