Praktikum Blut

PHYSIOLOGISCHES INSTITUT DER UNIVERSITÄT KIEL
FUNKTIONEN DES BLUTES
KURSUS DER PHYSIOLOGIE für Pharmazeuten
ROTES BLUTBILD
Osmotische Resistenz und Hämolyse der Erythrocyten
In begrenztem Umfang können Zellen osmotische Druckdifferenzen an ihrer Zellmembran ausgleichen,
in h y p e r toner Umgebung verlieren sie Zellwasser und schrumpfen (Beispiel:
Stechapfelform des Erythrocyten=Echinocyten). In h y p o toner Umgebung erfolgt ein Wassereinstrom,
die Zellen schwellen an (Sphärocyten) und platzen schließlich. Hierbei gelangen intrazelluläre
Makromoleküle in den Extrazellulärraum (Beispiel: Hämolyse des Erythrozyten). Auch
in i s o t o n e r Umgebung kann es zur Hämolyse kommen, z.B. in Gegenwart von Detergentien,
Äther, Antikörpern, oder angeborenen Membrandefekten der Erythrocyten und Parasitenbefall
(Malaria). Gelöste Stoffe, die gut durch die Erythrocytenmembran diffundieren (wie z.B.
Harnstoff), können an ihr nicht ormotisch wirksam werden, so daß es in isotoner (elektrolytfreier)
Harnstofflösung rasch zur Hämolyse kommt. Handelt es sich um eine nur wenig membrangängige
Substanz, z. B. Glukose in isotoner Lösung, dann tritt keine (sofortige) Hämolyse ein.
Aufgabe 1
Venöses Blut wird unter ärztlicher Anleitung entnommen und zur Hemmung der Blutgerinnung
mit Citrat-Lösung gemischt (Wirkmechanismus?).
Aufgabe 2
Citrat-Blut wird unter dem Video-Mikroskop auf Objektträgern mit verschiedenen Lösungen
versetzt (Zentrale Projektion). Das Verhalten der Erythrocyten wird von den Teilnehmern
protokolliert (Hämolyse ja/nein, geschätzter Anteil der Hämolyse, Erythrocyten als
Normocyt/Sphärocyt/Stechapfel). Isotone (2a), hypertone (2b) und hypotone (2c) NaCl-
Lösung, NaCl-Lösung mit Seifen- (2d) und Lösungsmittelzusatz (2e), Isotone Harnstoff-
(2f) und Glukose-Lösung (2g)
KAPILLARBLUT
Für die Blutgruppenbestimmung und die Anfertigung eines Differentialblutbildes ist die Gewinnung
von Kapillarblut erforderlich. Dieses läßt sich mit relativ geringem instrumentellen und zeitlichen
Aufwand gewinnen.
Aufgabe 3
Die Durchblutung des Ohrläppchens (Kuppe des Ringfingers) wird durch Reiben oder Erwärmen
gesteigert, anschließende Reinigung (Kodanspray, Tupfer) und warten, bis die
Haut trocken ist. Daraufhin mit einer sterilen Lanzette in das Ohrläppchen (den Ringfinger)
kurz 2 - 3 mm tief einstechen. Den ersten austretenden Blutstropfen mit einem trockenen
Tupfer abwischen, das danach (möglichst spontan austretende) Blut verwenden.
Bei ungenügendem Blutfluß erneut punktieren (nicht Quetschen, interstitielle Flüssigkeit
verfälscht die Messungen).
BLUTGRUPPEN
A-B-O - S y s t e m: Vor Bluttransfusionen werden bei der KREUZPROBE im Majortest Erythrocyten
des Spenders mit frischem Serum des Empfängers vermischt (Minortest: Serum des
Spenders + Empfängererythrocyten). Bei inkompatiblen Blutgruppen kommt es zur Zusammenballung
und Ausfällung der Erythrocyten (Agglutination). Die Agglutination wird durch Antikörper
hervorgerufen, die gegen Strukturen der Erythrocytenmembran gerichtet sind (Antigen-Antikör-

per-Reaktion). Je nach Membran-beschaffenheit unterscheidet man 4 Hauptgruppen: A, B, O
und AB. Die Gruppe A hat z.B. Erythrocyten mit A-Eigenschaften auf der Membran und den -
Antikörper Anti-B im Serum, die Gruppe O hat weder A- noch B-Eigenschaften auf der Erythrocytenmembran,
dagegen Anti-A und Anti-B im Serum.
Rh - S y s t e m: Bei den meisten Europäern (85%) bringt Serum von Versuchstieren, die man
gegen Erythrocyten von Rhesusaffen immunisiert hat, die Erythrocyten zur Agglutination (Rhpositiv).
In über 90% der Fälle ist hieran das Antigen-D auf der Erythrocytenmembran beteiligt,
so daß üblicherweise das Fehlen dieses Antigens als rh-negative Blutgruppeneigenschaft bezeichnet
wird. Nach versehentlicher Transfusion Rh-positiven Blutes auf rh-negative Empfänger
(oder gelegentlich bei Geburt eines Rh-positiven Kindes durch eine rh-negative Mutter) bilden
sich im Verlaufe einiger Wochen gegen Rh-positive Erythrocyten gerichtete Antikörper im Blut
des Empfängers (Sensibilisierung, Antikörper erworben im Gegensatz zum ABO-System).
Aufgabe 4
a) Es werden Blutgruppen-Dokumentationskarten ausgeteilt, die auf entsprechenden Feldern
jeweils einen Tropfen Testserum (A, B, O, Anti-D) enthalten (Ausgabe durch Assistent/in).
b) Ein kleiner Blutstropfen wird mit der Ecke eines Objektträgers aufgefangen und auf dem
markierten Feld einer Blutgruppendokumentationskarte in den Serumtropfen Anti-A getaucht.
Mit einer anderen Ecke des Objektträgers einen weiteren kleinen Blutstropfen auffangen und
in das nächste Serum geben.
c) 2 - 3 min Mischen durch vorsichtiges Schwenken bzw. Umrühren (Plastikspatel). Die Proben
werden bei guter Beleuchtung, im Zweifelsfalle (z.B. bei der Bewertung der Rh-Eigenschaft)
unter dem Mikroskop bei schwacher Vergrößerung und im Auflicht in Hinblick auf Agglutinationen
untersucht. Das Ergebnis wird entsprechend Tab.1 interpretiert und protokolliert
WEISSES BLUTBILD (Differentialblutbild)
Die Zahl der Leukocyten im peripheren Blut ist wesentlich geringer und viel stärkeren Schwankungen
unterworfen als die der Erythrocyten. Etwa 5% aller Leukocyten finden sich im strömenden
Blut; ca. 57% befinden sich am Ort ihres Wirkens (Darm, Milz, Lunge, Schleimhäute
etc.) und die restlichen 38% reifen in ihren Bildungsstätten heran. 1 Mikroliter Blut des Erwachsenen
enthält etwa 5.000 bis 10.000, durchschnittlich 7.000 Leukocyten.
Aufgabe 5:
a) Ein Blutstropfen aus dem Ohrläppchen wird am Rande der Schmalseite eines neuen Objektträgers
entsprechend Abb. 1A (auf der folgenden Seite) aufgebracht. Der Objektträger
wird in der Luft gedreht (hängender Blutstropfen), das Blut auf einem 2. Objektträger sofort
dünn ausgestrichen (Abb.1B) und etwa 2 min an der Luft getrocknet. Ein schwach rötlicher,
durchsichtiger Ausstrich erleichtert die Auswertung.
b) Durch kurzes Eintauchen in ein bereitstehendes Methanol-Bad wird der Ausstrich nochmals
fixiert. Einen Tropfen Pufferlösung auf die Zellschicht geben (Abb.1C) und die Färbefolie
so darüberlegen, daß der Firmenaufdruck lesbar ist. 5 min warten. Die an der Unterseite
der Folie adsorbierten Farbstoffpartikel diffundieren in dieser Zeitspanne durch die Pufferlösung
zu den Zellen und färben die Kerne der Leukocyten analog zur klassischen Färbung
nach PAPPENHEIM.
c) Auf die Färbefolie wird ein Tropfen (Mikroskopier) Immersionsöl gegeben (vgl.Abb.1C)
und das mit “Oel” gekennzeichnete Objektiv in das Immersionsöl eingetaucht. Die Zähltechnik
erfolgt nach der “Vierfelder-Mäander-Methode” (Abb.1D). Differenzieren und protokollieren
Sie 100 weiße Blutkörperchen nach der aushängenden Abbildung in (Angaben in %)

Abb. Anfertigung und Auswertung eines Blutausstriches
ZELLTYP STRICHLISTE %
1. Lymphocyten
2. neutrophile Granulocyten
3. basophile Granulocyten
4. eosinophile Granulocyten
5. Monocyten.
BlutGro07