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Methoden - Kapitel 3.4.
Primersequenzen, Farbmarkierungen und Konzentrationen sind bei Schmidt et al.
2003, für Amelogenin bei Seidenberg et al. 2012, nachzulesen. Ein Standardansatz
mit 25µl Volumen und variablen DNA-Einsatz setzte sich somit aus folgenden
Komponenten zusammen (Tab. 3.4):
Tabelle 3.4: Komponenten eines 25µl-Ansatzes für
die Analyse gonosomaler STRs.
Komponente
µl je Probe
Qiagen 2x Mastermix plus 12,5
Primerset (Schmidt et al. 2003) 2,55
H 2 O (Fa. Ambion) 9,45 – 4,95
DNA-Extrakt 0,5 – 5
Gesamtvolumen 25
Die Cycling-Parameter entsprachen (Tab. 3.5):
Tabelle 3.5: Cycling-Parameter für die Analyse gonosomaler STRs.
Schritt Temperatur (°C) Dauer (min) Zyklen
Initial 95 5
Denaturation
Annealing
Elongation
94
50
72
0,6
0,6
0,6
Delay 60 45
Soak 10 10
40
Alle PCRs wurden in einem DNA Thermal Cycler Typ Mastercycler® gradient bzw.
personal der Firma Eppendorf durchgeführt.
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