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Methoden - Kapitel 3.4.
3.4.4. Amplifikation autosomaler STR-Systeme (genetischer Fingerabdruck)
Für die Überprüfung der morphologischen Zuordnung sowie die Sicherstellung der
Authentizität der nachfolgenden Analysen wurden genetische Fingerabdrücke für
jedes Individuum erstellt. Im Weiteren kann diese erste genetische Analyse einen
Eindruck über die DNA-Erhaltung eines Knochens geben und nachfolgende Analysen
vereinfachen.
Für die Generierung des genetischen Fingerabdrucks wurde ein laboreigenes Analysesystem
verwendet, das die sechs autosomalen STR-Systeme D5S818, D13S317,
D18S51, D21S11, FGA und TH01 sowie den Geschlechtsmarker Amelogenin enthält.
Diese Heptaplex (Abb. 3.6) wurde in mehreren Schritten zunächst durch Schilz
(2003) und Pfister (2008) entwickelt und nach weiteren Optimierungen abschließend
von Seidenberg und Kollegen publiziert (Seidenberg et al. 2012). Produktlängen,
Farbmarkierungen und Konzentrationen sind dort ebenfalls angegeben und wurden
für diese Arbeit entsprechend verwendet. Einzige Ausnahme dazu bildet das Primerpaar
für Amelogenin, das nicht mit dem grün fluoreszierenden HEX markiert worden
ist, sondern mit dem blau fluoreszierenden 6-FAM.
Abbildung 3.6: Allelleiter der Heptaplex nach Seidenberg et al. 2012. Abweichend von der Veröffentlichung
wurde in dieser Arbeit ein mit 6-FAM markierter Amelogeninprimer verwendet. x-
Achse = Länge der Produkte in Basenpaaren.
Ein Standardansatz einer Amplifikation mit 25µl-Volumen und variablem DNA-
Einsatz setzte sich somit aus folgenden Komponenten zusammen (Tab. 3.2):
Tabelle 3.2: Komponenten eines 25µl-Ansatzes für
die Analyse autosomaler STRs.
Komponente
µl je Probe
Qiagen 2x Mastermix plus 12,5
Primerset (Seidenberg et al. 2012) 2,85
H 2 O (Fa. Ambion) 9,15 – 0
DNA-Extrakt 0,5 – 9,65
Gesamtvolumen 25
50