Öffnen - eDiss - Georg-August-Universität Göttingen

Material - Kapitel 2.
Positivkontrollen der Krankheitserreger
Als Positivkontrolle für das Analysesystem von S. typhi resp. S. paratyphi dienten
Bakterienlysate, die von Prof. Dr. Uwe Groß vom Institut für Medizinische Mikrobiologie,
Göttingen, bereitgestellt wurden. Die Bakterienstämme S. typhi E005 und S.
paratyphi A wurden auf einer Agarplatte etwa eine Woche lang angezüchtet und die
entstandenen Kolonien anschließend in Wasser suspendiert. Die Bakterien wurden
dann durch Hitze getötet und mittels Ultraschallbehandlung zerstört, so dass die
DNA frei in Lösung gehen konnte. Diese Lysate wurden für 5 Minuten bei 6000rpm
zentrifugiert, 10µl des Überstandes wurden abgenommen und 1:10 mit HPLC-
Wasser verdünnt. Bei Bedarf wurde eine Verdünnungsreihe angelegt.
Für Positivkontrollen von Bartonella quintana wurden von zwei Stämmen (JK31
bzw. Toulouse) je ein Lysat von Prof. Volkhard Kempf von der Universität Frankfurt
bereitgestellt. Die Lysate wurden wie vorher beschrieben behandelt.
Positivkontrollen für Rickettsia prowazekii sind schwierig zu bekommen, da das
Bakterium schwer zu kultivieren ist, daher wurde auf eine Gendatenbank zurückgegriffen.
Von Prof. Siv Andersson von der Universität Uppsala, Schweden, wurden
Klone bereitgestellt, die das gesuchte Zielgen von R. prowazekii enthalten. Die Lysate
wurden wie vorher beschrieben behandelt.
Von Borrelia recurrentis wurden Proben von Herrn Prof. Dr. Reinhard Wallich und
Christiane Brenner aus dem Institut für Immunologie der Universität Heidelberg bereitgestellt.
Rezente Kontrollproben
Zum Erkennen von Kontaminationen durch den Bearbeiter und als Positivkontrolle
wurden Speichelextrakte von Bearbeitern des Skelettkollektivs und des anthropologischen
Institutes verwendet. Die Extrakte wurden in den meisten Fällen bereits zu
früheren Zeitpunkten gewonnen und lagern tiefgekühlt bei – 20° Celsius. Die Typisierungen
der Mitarbeiter und Bearbeiter (u.a. genetische Fingerabdrücke) sind in
einer internen Datenbank der Abteilung Historische Anthropologie gespeichert.
39