2 Material und Methoden

2.4 Translokation von Fluoreszenzfarbstoffen
2.4.1 Herstellen der Farbstofflösungen
Für die mikroskopischen Untersuchungen wurden Esterformen der phloemmobilen
Fluoreszenzfarbstoffe Carboxyfluoreszein (CF) [Esterform – CFDA (5,6
Carboxyfluoresceindiacetat), gemischte Isomere, Molekular Probes Eugene, Oregon USA,
C-195] und Hydroxypyrentrisulfonsäure (HPTS) [Esterform – HPTSA (8-Acetoxypyrene-
1,3,6-Trisulfonsäure Natriumsalz), Molekular Probes Europe, BV A-396] und der
Xylemmarker Texas Red Dextran 3000 (Molekular Probes Eugene, Oregon USA, D-3328 )
verwendet.
Von allen Farbstofflösungen wurden Stammlösungen hergestellt, die bei -20°C bis zu 7 Tage
gelagert werden konnten. Sie wurden für die Applikation entsprechend verdünnt:
Farbstoff Stammlösung Verdünnung mit H 2 O zur Applikation
CFDA 6mg / ml Aceton 1 : 20
HPTSA 5mg /ml H 2 O unverdünnt
Texas Red Dextran 3000 6mg / ml Methanol 1 : 20
2.4.2 Applikation der Farbstoffe
Die Translokation der Fluoreszenzfarbstoffe wurde im Wirt-Parasit-System Nicotiana
benthamiana-Cuscuta reflexa untersucht. Die Wirtspflanzen waren zum Zeitpunkt des
Versuches 7-8 Wochen alt, die Parasitierung erfolgte am Blattstiel oder an der Sproßachse
im parallelen Induktionsmodus.
Applikation von CFDA und HPTSA
Zur Applikation der Farbstoffe wurde die obere Epidermis ausgewachsener Blätter (≈ 80cm 2 )
ganzflächig mit extra feinem Sandpapier aufgerauht. Danach wurden pro Blattspreite 0,5ml
Farbstofflösung tropfenförmig aufgetragen. Um den Turgor der Blätter zu erhalten, ein
Eintrocknen der Farbstofflösung sowie ein Herabtropfen auf andere Blätter zu vermeiden,
wurden die Blattspreiten mit Haushaltsfolie abgedeckt. Die Wirt-Parasit-Systeme wurden
beleuchtet (120µE*m -2 *s -1 ) und gut bewässert. Die mikroskopischen Analyse erfolgte nach
1,5 Stunden.
17