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2.14.2 Antikörperreaktion Das Ponceau-Agens wurde durch Waschen der Nitrozellulose mit Leitungswasser entfernt. Anschließend wurde die Membran über Nacht bei 4°C in BPS-Tween-Puffer [20 mM Tris/HCl (pH 7,5), 178mM NaCl, 0,05% (w/v) Tween 20] mit 5% Milchpulver inkubiert. Für die Behandlung mit dem ersten und zweiten Antikörper (siehe Tabelle 2.3) wurde die Nitrozellulose zusammen mit 5ml Antikörperlösung in Haushaltsfolie eingeschweißt und jeweils 1,5 Stunden bei Raumtemperatur auf einem Horizontalschüttler inkubiert. Nach jeder Antikörperreaktion wurde die Nitrocelluose-Membran fünfmal für 5 Minuten mit BPS-Tween- Puffer gewaschen. Im Anschluß an den letzten Waschvorgang wurde die Membran zum Anfärben der Proteinbanden für 5 Minuten mit 5-Brom-4-Chlor-Indolylphosphat / Nitroblau- Tetrazolium [Sigma FAST, BCIP / NBT Alkaline Phosphate Substrate (1 Tablette / 10ml)] im Dunkeln exponiert. Die Farbreaktion wurde durch Abspülen der Färbelösung mit Wasser gestoppt. Nach dem Trocknen wurde die Nitrocellulose-Membran zur weiteren Dokumentation in Folie eingeschweißt und aufbewahrt. Tab. 2.3: Übersicht über die verwendeten Antikörper Antikörper Hersteller Konzentration [µl] ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ Anti-PVX Scottish Crop Research Institute 1 / 1.000 Anti-Rabbit Sigma (Saure Alkaline Phosphatase) 1 / 4.000 29
2.15 Verwendete radioaktive Verbindungen Tab.2.4: In den Experimenten verwendete radioaktive Verbindungen Substanz bezogen von Spezifische Radioaktivität 3 H-Inulin Amersham 38,1 GBq *⋅mmol -1 3 H–Aminoisobuttersäure ARC 555 GBq *⋅mmol -1 3 H-Indolylessigsäure Amersham 925 GBq *⋅mmol -1 3 H-Abscisinsäure Amersham 2,11 TBq⋅* mmol -1 3 H-Saccharose Amersham 207 GBq *⋅mmol -1 14 C-Saccharose Amersham 9,9 GBq *⋅mmol -1 14 C-Aminoisobuttersäure Amersham 2,18 GBq *⋅mmol -1 14 C-Alanin Amersham 1,5 GBq⋅* mmol -1 14 C-Leucin UVVVR Prag 7,4 GBq⋅* mmol -1 14 C-MCPA Amersham 2,1 GBq *⋅mmol -1 14 C-2,4-D Rossendorf 413,9 MBq *⋅mmol -1 14 C-Glyphosat Amersham 2,0 GBq⋅* mmol -1 14 C-Na 2 CO 3 Rossendorf 1,67 GBq⋅* mmol -1 2.16 Auswertung der Ergebnisse Zur Absicherung der Ergebnisse wurden alle Versuche mehrmals wiederholt. Die Anzahl der Einzelwerte ist mit „n„ angegeben. Die in den Tabellen angegebenen Ergebnisse stellen, wenn nicht anders vermerkt, Mittelwerte und Standardfehler der Mittelwerte dar. Bei den errechneten Standardfehlern wurden Konfidenzgrenzen mit einer Irrtumswahrscheinlichkeit von 5% zu Grunde gelegt. 2.17 Begriffsdefinitionen Mit „Translokationsrate„ wird der prozentuale Anteil der aus dem Fütterungsort austransportierten radioaktiven Verbindungen an der Gesamtmenge der radioaktiven Verbindungen im Wirt-Parasit-System (W-P-S) bzw. in der nicht parasitierten Wirtspflanze bezeichnet. 30
Seite 1 und 2: 2 MATERIAL UND METHODEN 2.1 Anzucht
Seite 5 und 6: 2.2 Einteilung der Wirt-Parasit-Sys
Seite 7 und 8: 2.3.4 Applikation radioaktiv markie
Seite 9 und 10: Texas Red Dextran 3000 Für eine Do
Seite 11 und 12: Screen (Molecular Dynamics). Anschl
Seite 13 und 14: • 7mM MgCl 2 x H 2 O • 4mM UDP
Seite 15 und 16: eingesetzten Marker wurden vom Depa
Seite 17 und 18: 2.12.2 Reverse Transkriptase-Polyme
Seite 19: 4% SDS; 0,2% Bromphenolblau; 20% Gl

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