2 Material und Methoden

2.5 Anfertigung der Semidünnschnitte
Erfolgreich parasitierte Blattstiele von Pelargonium wurden in 1-2mm dicke Scheiben
geschnitten und mit Hilfe eines Einbettungsautomaten (LYNXel, Australian Biomedical
Corporatio, LTD, Mount Waverley, Vic. Australien) mit Glutaraldehyd fixiert, mit
Osmiumtetroxid kontrastiert und in ERL (Fluka, Buchs, Schweiz) eingebettet.
Die Polymerisation erfolgte während 120 Stunden bei 60°C. Zur Anfertigung der
Semidünnschnitte (Dicke = 0,5µm) wurde ein Ultramikrotom (Reichert OmU 2, Wien,
Österreich) benutzt. Für die Photographie wurden die Schnitte mit Azur2-Methylenblau (1%
Azur 2 in Aqua dest./ 1% Methylenblau in 1% Borax; = 1:1) gefärbt.
2.6 Dünnschichtchromatographie (DC)
Für die Trennung von Zuckern wurden Kieselgel Fertigplatten (Silufol, Kavalier Votice,
Tschechien) verwendet. Methanolische Extrakte der zu untersuchenden Pflanzenabschnitte
wurden am Rotationsverdampfer bis zur Trockne eingeengt, in einer definierten Menge
Methanol aufgenommen und 10-20µl dieser Lösung punktförmig aufgetragen. Die Trennung
erfolgte durch fünfmaliges Entwickeln in Chloroform : Eisessig : Wasser = 30 : 35 : 5 bei
voller Kammersättigung (DE STEFANIES & PONTE, 1968). Die Detektion der einzelnen Zucker
erfolgte durch Besprühen mit Anilin-Diphenylamin und anschließender Erwärmung der
Folien auf 110ºC im Trockenschrank (SCHWIMMER & BEVENNE, 1956). Die Zucker erscheinen
dabei in folgenden Farben: Saccharose – graubraun, Glucose – blau, Fructose – rot. Zur
Identifizierung diente ein Standardgemisch aus Saccharose, Glucose und Fructose. Für die
quantitative Radioaktivitätsbestimmung der markierten Zucker wurden die entwickelten
Chromatogramme auf einem Screen exponiert und mit dem Phosphorimager ausgewertet.
2.7 Nachweis der Lokalisation radioaktiv markierter Verbindungen mit dem
Phosphorimager
Zum Nachweis der Lokalisation radioaktiver Verbindungen in Geweben wurden 1mm dicke
Handschnitte aus den zu untersuchenden Pflanzenabschnitten angefertigt, bei -20°C
eingefroren und für 24 Stunden zwischen Objekträgern gefriergetrocknet.
Dünnschichtchromatogramme wurden nach dem Entwickeln sorgfältig getrocknet, um alle
Laufmittelreste zu entfernen, die zu einer Beschädigung des Screens führen können.
Je nach Radioaktivitätsgehalt erfolgte die Exposition der gefriergetrockneten Handschnitte
bzw. die Dünnschichtchromatogramme für 12-96 Stunden auf einem Storage Phosphor
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