2 Material und Methoden

Material und Methoden
Rührer:
• MR 1000 und 3001 von Heidolph, Kelheim.
• Ikamag RH von Janke & Kunkel, Staufen.
Schüttler und Thermomixer:
• Themomixer compact 5436 von Eppendorf, Hamburg
• Schüttelinkubatoren: VKS-75 Control und SM-30 von Edmunf Bühler, hechingen
• Schüttler Innove 4300 von New Brunswick Scientific, Edison, NJ, USA
• Schüttler HT von Infors, Bottmingen, Schweiz
Speed Vac:
• Plus SC110A von Savant Instuments, Farmindale, NY, USA
Thermocycler:
• Omn-E von Hybaid, Heidelberg
• Personal Cycler von Biometra, Göttingen
Waagen:
• FA-1500-1 von Faust, Köln
• Analytical Standard A560 von Ohaus, Gießen
Western-Blot-Apparatur:
• Semi-Dry-Blotting-Apparatur: SEMI-PHOR von Hoefer, Netzteil: EPS-200 von Amersham
Pharmacia, Uppsala, Schweden
2.2 Molekularbiologische Methoden:
2.2.1 Kultivierung und Konservierung von E-coli-Stämmen
Die Anzucht von E. coli-Stämmen erfolgte bei 37 °C in LB-Medium, dem bei plasmidtragenden
Stämmen das entsprechende Antibiotikum zugesetzt wurde. Vorkulturen wurden mit Einzelkolonien
von LB-Agar-Platten angeimpft. Das Wachstum wurde durch Messung der optischen Dichte bei
578 nm verfolgt. Zur dauerhaften Lagerung der Stämme wurden 200 µl einer stationären
Übernachtkultur mit 200 µl 20 % (w/v) Glycerinlösung versetzt, in flüssigem Stickstoff
schockgefroren und bei –80 °C aufbewahrt.
2.2.2 Transformation von E. coli mit Plasmid-DNA
Die Einführung von Plasmiden in E. coli wurde mittels Elektroporation durchgeführt. Die
Überführung der E. coli-Stämme in eine transformationskompetente Form erfolgte nach Ausubel und
Mitarbeitern (Ausubel et al., 1987). Dabei wurden die Zellen nach Animpfung 1:100 mit einer
Übernachtkultur in einem Verhältnis 1:100 bei 37 °C bis zu einer optischen Dichte von 0.5 - 0.6 bei
578 nm kultiviert. Nach einer 30minutigen Inkubation auf Eis, wurden die Zellen abzentrifugiert
(15 min; 4000 x g; 4 °C), 3 x mit einer eiskalten 10 % (w/v) Glycerinlösung gewaschen und
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