2 Material und Methoden

Material und Methoden
2.1.10 Medien, Antibiotika und Puffer
LB-Medium: 10 g/l Bacto Trypton; 5 g/l Yeast Extract; 5 g/l NaCl, pH 7,0
SOC-Medium: 20 g/l Trypton, 5 g/l Yeast Extract, 0,5 g/l NaCl mit H 2 O auf
100 ml auffüllen und autoklavieren, + 1 ml 1M MgCl 2, , + 1 ml 1 M MgSO 4 ,
+ 1 ml 20 % (w/v) Glucose
Fermentationsmedium: 16,0 g Na 2 SO 4 , 19,74 g (NH 4 ) 2 SO 4 , 4,0 g NH 4 Cl, 116,8 g K 2 HPO 4 ,
32,0 g NaH 2 PO 4 x2 H 2 O, 8,0 g (NH 4 ) -Citrat. Die Salze wurden in 8 Liter
entionisiertem Wasser gelöst, und der pH-Wert mit 5 M NaOH auf pH 7.0
eingestellt.
Feeding-Lösung: In 100 ml kochendes Wasser wurden 330 g Glucose gelöst. Die Lösung
wurde daraufhin auf 400 ml mit H 2 O aufgefüllt und autoklaviert.
Es wurden 50 ml einer Mineralsalzlösung (1 g Na2SO4, 1,246 g (NH 4 ) 2 SO4, 0,25 g NH 4 Cl,
7,3 g K 2 HPO4, 1.8 g NaHPO4x2H 2 O, 0,5 g (NH 4 ) 2 -Citrat/ 50 ml H 2 O) angesetzt und autoklaviert.
Zur Herstellung der Feeding-Lösung wurde die Glucoselösung, die Mineralsalzlösung, 1 ml MgSO4
und 5 ml Spurenelemente (CaCl 2 x 6 H 2 O 0.74g/l; ZnSO 4 x 7 H 2 O 0.18 g/l; MnSO 4 x H 2 O 0.1 g/l; Na-
EDTA 20,1 g/l; FeCl x 6 H 2 O 16,7 g/l; CuSO 4 0.1 g/l; CoCl 0,104 g/l) unter Sterilbedingungen
zusammengegeben und vermischt.
Antibiotika-Stammlösungen:
Ampicillin 100 mg/ml in H 2 O
Kanamycin 50 mg/ ml in H 2 O
Die Lösungen wurden sterilfiltriert und bei –20 °C gelagert. Zugabe zum Medium erfolgte im
Verhältnis 1:1000 (v/v).
2.1.11 Puffer
TAE-Puffer (50fach):
TE-Puffer:
Tris-Glycin-Puffer (10fach):
DNA-Probenpuffer (5fach):
DNA-Agarosegele:
DNA-Sequenzierungsgel:
2 M Tris; 1M Essigsäure,; 100 mM EDTA,
pH 8,5
10 mM Tris-HCl, pH 8,0; 1 mM EDTA
250 mM Tris-HCl, pH 8,3; 1,87 M Glycin;
1 % (w/v) SDS
10 mM Tris-HCl,, pH 8,0; 150 mM EDTA;
30 % (v/v) Glycerol; 0,25 % (w/v)
Bromphenolblau
0,8-1,5 % (w/v) Agarose in TAE-Puffer
(6 % (w/v) Acrylamid; 41 cm Länge; 0,25 mm
Dicke): 30 ml SequaGel, XR Complete Buffer
Reagent; 7,5 ml SequaGel Acrylamidlösung;
400 µl DMSC; 300 µl APS (10 % (w/v)).
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