Effekt selektiver und nicht selektiver nichtsteroidaler Antiphlogistika ...
Effekt selektiver und nicht selektiver nichtsteroidaler Antiphlogistika ... Effekt selektiver und nicht selektiver nichtsteroidaler Antiphlogistika ...
Material und Methoden silanbeschichtete Objektträger (Objektträger Histobond ® , Paul-Marienfeld GmbH&CoKG, Lauda-Königshof, Deutschland) gezogen. Anschließend wurden die Schnitte über Nacht im 60 °C warmen Wärmeschrank getrocknet. 3.3.2 Vorbehandlung der Schnitte für histologische Färbungen und Immunhistochemie Sowohl für die Färbungen als auch für die Immunhistochemie (IHC) wurden Objektträger mit je einem Gewebeschnitt hergestellt. Nach Einbringen der Objektträger in ein Glasschiffchen wurden sie entparaffiniert und anschließend rehydriert. Entparaffinieren: Xylol I Xylol II 10 Minuten 10 Minuten Rehydratation: Isopropanol 2 Minuten 100 % Ethanol 2 Minuten 80 % Ethanol 2 Minuten (histologische Färbung) 80 % Ethanol + 3 % H 2 O 2 30 Minuten (IHC) 70 % Ethanol 2 Minuten Die sich an die Färbung bzw. IHC anschließende Dehydratation der Proben erfolgte sowohl für die HE-Färbung als auch für die IHC nach demselben Schema: Dehydratation: 70 % Ethanol 2 Minuten 80 % Ethanol 2 Minuten 100 % Ethanol 2 Minuten Isopropanol 2 Minuten Xylol I 5 Minuten Xylol II 5 Minuten Bei der Lunafärbung wurde die Dehydratation modifiziert (s. 3.3.3.2). 68
Material und Methoden 3.3.3 Histologische Färbungen Es wurden zwei histologische Färbungen durchgeführt. Zur Prüfung von Qualität und Intaktheit der Schnitte bzw. Blöcke die HE-Färbung und für die Folgeversuche die Lunafärbung, eine spezifische Färbung zur Darstellung von eosinophilen Granulozyten. Die Zusammensetzung der Lösung für die HE- und Lunafärbung ist im Anhang aufgelistet. 3.3.3.1 Hämatoxylin-Eosin Färbung Für die HE-Färbung wurden formalinfixierte Gewebeschnitte verwendet. Färbeprotokoll: Das Entparaffinieren und die Rehydratation erfolgte wie unter 3.3.2 beschrieben. Färbung und Gegenfärbung: Aqua dest. 2 Minuten Hämalaun nach Delafield 8 Minuten 0,1 % HCl (in Aqua dest.) 3-4 x Spülen fließendes Leitungswasser 15 Minuten 1 % Eosin + 3-4 Tropfen Eisessig 5 Minuten Aqua dest. 2 Minuten Nach Dehydratation (3.3.2) wurden die Proben mit Eukitt (O. Kindler GmbH, Freiburg, Deutschland) eingedeckt. 3.3.3.2 Lunafärbung Für die Lunafärbung wurden Bouin fixierte Gewebeschnitte verwendet. Färbeprotokoll: Das Entparaffinieren und die Rehydratation erfolgte wie unter 3.3.2 beschrieben. Färbung: Aqua dest. 5 Minuten Biebrich-Scharlachrot-Hämatoxylin 5 Minuten Aqua dest. 2 Minuten 1 % Säurealkohol 16 Sekunden (in der Zeit 8 x dippen) 69
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Material <strong>und</strong> Methoden<br />
3.3.3 Histologische Färbungen<br />
Es wurden zwei histologische Färbungen durchgeführt. Zur Prüfung von Qualität <strong>und</strong><br />
Intaktheit der Schnitte bzw. Blöcke die HE-Färbung <strong>und</strong> für die Folgeversuche die<br />
Lunafärbung, eine spezifische Färbung zur Darstellung von eosinophilen<br />
Granulozyten. Die Zusammensetzung der Lösung für die HE- <strong>und</strong> Lunafärbung ist im<br />
Anhang aufgelistet.<br />
3.3.3.1 Hämatoxylin-Eosin Färbung<br />
Für die HE-Färbung wurden formalinfixierte Gewebeschnitte verwendet.<br />
Färbeprotokoll:<br />
Das Entparaffinieren <strong>und</strong> die Rehydratation erfolgte wie unter 3.3.2 beschrieben.<br />
Färbung <strong>und</strong> Gegenfärbung:<br />
Aqua dest.<br />
2 Minuten<br />
Hämalaun nach Delafield<br />
8 Minuten<br />
0,1 % HCl (in Aqua dest.) 3-4 x Spülen<br />
fließendes Leitungswasser<br />
15 Minuten<br />
1 % Eosin + 3-4 Tropfen Eisessig 5 Minuten<br />
Aqua dest.<br />
2 Minuten<br />
Nach Dehydratation (3.3.2) wurden die Proben mit Eukitt (O. Kindler GmbH,<br />
Freiburg, Deutschland) eingedeckt.<br />
3.3.3.2 Lunafärbung<br />
Für die Lunafärbung wurden Bouin fixierte Gewebeschnitte verwendet.<br />
Färbeprotokoll:<br />
Das Entparaffinieren <strong>und</strong> die Rehydratation erfolgte wie unter 3.3.2 beschrieben.<br />
Färbung:<br />
Aqua dest.<br />
5 Minuten<br />
Biebrich-Scharlachrot-Hämatoxylin 5 Minuten<br />
Aqua dest.<br />
2 Minuten<br />
1 % Säurealkohol 16 Sek<strong>und</strong>en (in der Zeit 8 x dippen)<br />
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