Effekt selektiver und nicht selektiver nichtsteroidaler Antiphlogistika ...
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Ergebnisse 8. Einen Einfluss der Medikamente und einen Unterschied zwischen den Behandlungen mit Firocoxib bzw. Flunixin-Meglumin festzustellen ist mit Hilfe der Deskription nur eingeschränkt möglich. 4.3 RT-PCR Die RT-PCR diente dem Nachweis von COX-1 und COX-2 mRNA in der Tunica muscularis des Jejunums und damit als Bestätigung der Ergebnisse der COX-1 und COX-2 Immunhistochemie. In der RT-PCR konnte mRNA der COX-1 und COX-2 in der Tunica muscularis des equinen Jejunums nachgewiesen werden. Für beide COX zeigte sich je eine spezifische Bande auf der zu erwartenden Höhe (COX-1: 153 bp, COX-2: 118 bp) zu erwarten war (Abb. 42). bp 500 400 300 200 100 bp 500 400 300 200 100 A 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 B Abb. 42: Qualitativer Nachweis von COX-1 und COX-2 mRNA in der Tunica muscularis des equinen Jejunums mittels RT-PCR A: COX-1 RT-PCR: COX-1 spezifische Bande bei 153 bp (Pfeil); Analyse der PCR- Produkte in der Gelelektrophorese. bp = Basenpaare; Lanes 1 - 5: 1 = 100 bp-DNA- Marker; 2 = COX-1 Probe 1; 3 = COX-1 Probe 2; 4 = Negativkontrolle; 5 = 100 bp-DNA- Marker B: COX-2 RT-PCR: COX-2 spezifische Bande bei 118 bp (Pfeil); Analyse der PCR- Produkte in der Gelelektrophorese. bp = Basenpaare; Lanes 1 - 5: 1 = 100 bp-DNA- Marker; 2 = COX-2 Probe 1; 3 = COX-2 Probe 2; 4 = Negativkontrolle; 5 = 100 bp-DNA- Marker 4.4 Western Blot Der Western Blot diente dem weiteren Nachweis von COX-1 und COX-2 auf Proteinebene in der Tunica muscularis des Jejunums und damit als Bestätigung für die Ergebnisse der COX-1- und COX-2-Immunhistochemie. Im Western Blot konnte 138
Ergebnisse die COX-1 auf Proteinebene in der Tunica muscularis des equinen Jejunums nachgewiesen werden. Für die COX-1 zeigte sich eine spezifische Bande auf der zu erwartenden Höhe (COX-1: 72 kDa) (Abb. 43 A). Das Protein β-Aktin (43 kDa) wurde als Ladekontrolle eingesetzt (Abb. 43). Der Versuch des Nachweises für die COX-2 auf Proteinebene ergab trotz mehrmaliger Versuche sowohl für die als Positivkontrolle eingesetzte Probe aus Tunica mucosa und Tela submucosa als auch für die zu untersuchende Probe der Tunica muscularis kein spezifisches Ergebnis. Das als Ladekontrolle eingesetzte β-Aktin (43 kDa) zeigte eine spezifische Bande auf der zu erwartenden Höhe (Abb. 43 B). Abb. 43: Qualitativer Nachweis von COX-1 und COX-2 in der Tunica muscularis des equinen Jejunums mittels Western Blot Abb. A (links): Qualitativer Nachweis von COX-1 Proteinen mittels Western Blot; β- Aktin als Ladekontrolle; COX-1 spezifische Bande bei 72 kDa (durchgängiger Pfeil); β- Aktin spezifische Bande bei 43 kDa (gestrichelter Pfeil); kDa = Kilodalton; P1 = Muscularisprobe 1 (20 µg Protein eingesetzt), P2 = Muscularisprobe 2 (40 µg Protein eingesetzt), pos. K. = Positivkontrolle (Tunica mucosa und Tela submucosa), neg. K. = Negativkontrolle (nur TBS, kein Primärantikörper) Abb. B (rechts): Qualitativer Nachweis von COX-2 Proteinen mittels Western Blot; β- Aktin als Ladekontrolle; COX-2 spezifische Bande bei 70-72 kDa kann bei Probe und Positivkontrolle nicht nachgewiesen werden (gepunkteter Pfeil); β-Aktin spezifische Bande bei 43 kDa (gestrichelter Pfeil); kDa = Kilodalton; P1 = Muscularisprobe 1 (20 µg Protein eingesetzt), P2 = Muscularisprobe 2 (40 µg Protein eingesetzt), pos. K. = Positivkontrolle (Tunica mucosa und Tela submucosa), pos. K.1 (20 µg Protein eingesetzt), pos. K.2 (40 µg Protein eingesetzt), neg. K. = Negativkontrolle (nur TBS, kein Primärantikörper) 139
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Ergebnisse<br />
die COX-1 auf Proteinebene in der Tunica muscularis des equinen Jejunums<br />
nachgewiesen werden. Für die COX-1 zeigte sich eine spezifische Bande auf der zu<br />
erwartenden Höhe (COX-1: 72 kDa) (Abb. 43 A). Das Protein β-Aktin (43 kDa) wurde<br />
als Ladekontrolle eingesetzt (Abb. 43). Der Versuch des Nachweises für die COX-2<br />
auf Proteinebene ergab trotz mehrmaliger Versuche sowohl für die als<br />
Positivkontrolle eingesetzte Probe aus Tunica mucosa <strong>und</strong> Tela submucosa als auch<br />
für die zu untersuchende Probe der Tunica muscularis kein spezifisches Ergebnis.<br />
Das als Ladekontrolle eingesetzte β-Aktin (43 kDa) zeigte eine spezifische Bande auf<br />
der zu erwartenden Höhe (Abb. 43 B).<br />
Abb. 43: Qualitativer Nachweis von COX-1 <strong>und</strong> COX-2 in der Tunica muscularis des<br />
equinen Jejunums mittels Western Blot<br />
Abb. A (links): Qualitativer Nachweis von COX-1 Proteinen mittels Western Blot; β-<br />
Aktin als Ladekontrolle; COX-1 spezifische Bande bei 72 kDa (durchgängiger Pfeil); β-<br />
Aktin spezifische Bande bei 43 kDa (gestrichelter Pfeil); kDa = Kilodalton; P1 =<br />
Muscularisprobe 1 (20 µg Protein eingesetzt), P2 = Muscularisprobe 2 (40 µg Protein<br />
eingesetzt), pos. K. = Positivkontrolle (Tunica mucosa <strong>und</strong> Tela submucosa), neg. K. =<br />
Negativkontrolle (nur TBS, kein Primärantikörper)<br />
Abb. B (rechts): Qualitativer Nachweis von COX-2 Proteinen mittels Western Blot; β-<br />
Aktin als Ladekontrolle; COX-2 spezifische Bande bei 70-72 kDa kann bei Probe <strong>und</strong><br />
Positivkontrolle <strong>nicht</strong> nachgewiesen werden (gepunkteter Pfeil); β-Aktin spezifische<br />
Bande bei 43 kDa (gestrichelter Pfeil); kDa = Kilodalton; P1 = Muscularisprobe 1 (20 µg<br />
Protein eingesetzt), P2 = Muscularisprobe 2 (40 µg Protein eingesetzt), pos. K. =<br />
Positivkontrolle (Tunica mucosa <strong>und</strong> Tela submucosa), pos. K.1 (20 µg Protein<br />
eingesetzt), pos. K.2 (40 µg Protein eingesetzt), neg. K. = Negativkontrolle (nur TBS,<br />
kein Primärantikörper)<br />
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