TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

ERGEBNISSE
5.1.3.4 Einfluss des Serums während des Kumulationsversuchs
Für den Kumulationsversuch wurden die Zellen für die Dauer des Versuchs (3
Stunden) auf ein serum- und wachstumsfaktorfreies Versuchsmedium (Opti-MEM ® )
umgestellt, um mögliche Wechselwirkungen mit dem Substrat Rhodamin 123
auszuschließen. Die unter den Abbildungen 5.4, 5.5 und 5.8 dargestellten Versuche
zeigten keine einheitlichen Effekte der einzelnen Substanzen. Zudem führten
einzelne Induktoren (Doxorubicin, Puromycin und Vincristin) zu Zellablösungen
während der Behandlung. Zur Untersuchung, ob das im Versuchsmedium fehlende
Serum einen Einfluss hat, wurden einzelne Versuche mit Serum-versetztem Opti-
MEM ® durchgeführt (nicht dargestellt). Dabei wurde die gleiche Serumkonzentration
wie im Kulturmedium der hCMEC/D3-Zellen verwendet. In diesen Versuchen wurden
keine Unterschiede zur Modulation der Pgp-Funktionalität zwischen dem
Versuchsmedium mit und ohne Serum nachgewiesen. Veränderungen in Bezug auf
Messbarkeit und Beeinflussung der Funktionalität des MDT Pgp konnten nicht
festgestellt werden, weshalb nach dem üblichen Protokoll verfahren wurde, in dem
für den Versuch die Umstellung der Zellen auf serumfreies Medium erfolgte.
5.1.3.5 Hydrocortison und dessen Einfluss auf den Efflux
Die hCMEC/D3-Zellen wurden nach dem Protokoll von Dr. P.-O. Couraud mit
1,4 µM Hydrocortison kultiviert. Dieser Mediumszusatz soll zu einer Erhöhung der
Dichtigkeit, die für Transportversuche notwendig ist, beitragen. Für
Kumulationsversuche sind dichte Monolayer nicht notwendig. Hydrocortison kann
das Zellwachstum mindern, sodass beispielsweise weniger Zellen mit den
Testsubstanzen inkubiert werden und sich dies auf die Resultate der Kumulations-
Assays auswirken kann. Zudem ist für Hydrocortison bekannt, dass es die
Funktionalität Pgps induziert (MAINES et al. 2005). Um die Effekte von Hydrocortison
abschätzen zu können, wurden hCMEC/D3-Zellen ab der Aussaat für die Versuche
mit und ohne Hydrocortison kultiviert und für zwei Kumulationsversuche mit dem
Pgp-Induktor Dexamethason und verschiedenen Antiepileptika behandelt.
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