TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

ERGEBNISSE
25000
hCMEC/D3 P:30
n=6
3 H-Digoxin
(DPM/mg Protein)
20000
15000
10000
5000
0
Kontrolle
TQD 0,5 µM
Abbildung 5.3: Digoxin-Kumulation in einem beispielhaften Versuch mit hCMEC/D3-Zellen.
Tariquidar zeigte in der erprobten Konzentration von 0,5 µM keine Inhibition des Efflux von
Digoxin im Vergleich zur Kontrollgruppe. Die Zellen wurden über 3 Tage täglich mit frischem
Medium versorgt. Der Versuch fand 6 Tage nach Erreichen der Konfluenz statt. Die Inkubation
mit dem Substrat Digoxin erfolgte mit einer Konzentration von 1 µM Digoxin + 10 kBq/ml 3 H-
Digoxin. Die Zellen wurden am Tag des Kumulations-Assays für 3 h mit dem spezifischen
Inhibitor Tariquidar inkubiert. Die Werte sind als Mittelwerte + Standardfehler (SEM) in DPM/mg
Protein angezeigt.
Abkürzung: TQD: Tariquidar.
Aufgrund des ausbleibenden Effekts durch Tariquidar wurden alle nun im
Folgenden beschriebenen Kumulations-Assays mit den hCMEC/D3-Zellen sowie die
vergleichenden Assays mit GPNT- und RBE4-Zellen mit dem Fluoreszenzfarbstoff
Rhodamin 123 durchgeführt. In der folgenden Abbildung (5.4) wird deutlich, dass
Rhodamin 123 für die gewählten Versuchsbedingungen als Pgp-Substrat geeignet
ist, da sowohl signifikante Unterschiede im Substratgehalt zwischen dem
dargestellten Pgp-Induktor Dexamethason und den Kontrollgruppen, als auch
zwischen dem Inhibitor Tariquidar und den Kontrollen nachgewiesen werden
konnten.
66