TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

ERGEBNISSE
5.1.3 Pgp-Funktionalität in hCMEC/D3-Zellen: Kumulations-Assays
Die hCMEC/D3-Zellen wurden in den Passagen 31-43, GPNT-Zellen wurden
von Passage 30–59 und RBE4-Zellen von Passage 61-71 für Kumulationsversuche
verwendet. Die Substanzbehandlung der Zellen erfolgte dabei i.d.R. über 72 h mit
Beginn 3 Tage nach Erreichen der Konfluenz (siehe Abschnitt 4.3.1). Dabei wurde
täglich frisches Medium mit der jeweilig zu testenden Substanz und der
entsprechenden Konzentration vorbereitet und auf die Zellen gegeben. Der
Hemmstoff Tariquidar, der neben bekannten Pgp-Induktoren wie beispielsweise
Dexamethason ebenfalls in jedem Versuch mitgeführt wurde, wurde lediglich für
insgesamt 3 h (1 h Vorinkubation, 2 h Inkubation während des Versuchs) auf vorher
unbehandelten Zellen belassen.
Der Substratgehalt in den Zellen, der mit Hilfe des Kumulations-Assays
gemessen werden kann, stellt ein Maß für den Einfluss von Pgp auf die Kumulation
des Substrats dar. Man spricht von einer Induktion der Funktionalität, wenn der
Substrat-Gehalt in den Zellen im Vergleich zu den unbehandelten Zellen (Kontrolle)
abfällt. Ist der Gehalt des Substrats höher als in der Kontrollgruppe, geht man von
einer Hemmung der Transporter-Funktion aus. Der Inhibitor Tariquidar wurde in
jedem Versuch mitgeführt, um die Funktionalität des Transporters zu überprüfen und
sollte Aufschluss darüber geben, ob eine vorhergehende Induktion des Pgps wieder
aufgehoben werden kann.
5.1.3.1 Auswahl des Substrats
Die FDA empfiehlt für Untersuchungen der Pgp-Funktionalität das spezifische
Pgp-Substrat Digoxin. Für die humane Zelllinie hCMEC/D3 wurde deshalb ein
Kumulationsversuch mit radioaktiv-markiertem Digoxin durchgeführt, wobei lediglich
eine Kontrollgruppe und eine Gruppe von Zellen, dessen Efflux durch Tariquidar
gehemmt wurde, miteinander verglichen wurden.
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