TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover
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5.1.4.7 Einfluss der Umgebung der Zellen: Kokultur mit Astrozyten ....................................... 100 5.1.4.8 Überprüfung des Transports durch Pgp ......................................................................... 103 5.1.4.9 Integrität der Zellen anhand des TEERs und der Mannitol-Permeabilität ................. 106 5.1.4.10 Zusammenfassung der Transportuntersuchungen in hCMEC/D3-Zellen ................. 111 5.2 Primärkulturen des Hirnendothels der Ratte (rBCEC) .................................................... 114 5.2.1 Pgp-Expression in rBCEC-Zellen: Western Blot ....................................................................... 114 5.2.2 Pgp-Funktionalität in rBCEC-Zellen: Kumulations-Assays ..................................................... 115 5.2.3 Pgp-Funktionalität in rBCEC-Zellen: Transport-Assays .......................................................... 119 5.2.3.1 Auswahl des Substrats ..................................................................................................... 119 5.2.3.2 Einfluss des Membranformats und –formats ................................................................. 122 5.2.3.3 Die Kokultivierung der rBCEC-Zellen mit Astrozyten ................................................... 124 5.2.3.4 Geeignete Pgp-Inhibitoren zur Überprüfung des Transports ...................................... 127 5.2.3.5 Integrität primärer Zellen anhand des TEERs und der Mannitol-Permeabilität ........ 130 5.2.2.6 Zusammenfassung des Transports in primären Hirnendothelien der Ratte ............. 134 6 DISKUSSION ................................................................................................................. 137 6.1 Die humane immortalisierte Hirnkapillarendothelzelllinie hCMEC/D3 ......................... 139 6.1.1 Pgp-Expression in hCMEC/D3-Zellen ........................................................................................ 139 6.1.2 Die Modulation der Pgp-Funktionalität ...................................................................................... 139 6.1.2.1 Optimierung der Versuchsbedingungen ......................................................................... 140 6.1.2.2 Bekannte Pgp-Induktoren ................................................................................................. 141 6.1.2.3 Antiepileptika ...................................................................................................................... 144 6.1.2.4 Hydrocortison ..................................................................................................................... 148 6.1.2.5 Zusammenfassung der modulatorischen Effekte auf Pgp ........................................... 149 6.1.3 hCMEC/D3-Zellen als In-vitro-Bluthirnschranken-Modell ........................................................ 150 6.1.3.1 Einflüsse auf den Nachweis von Pgp-spezifischen Transport .................................... 151 6.1.3.2 Die Kokultur mit Astrozyten .............................................................................................. 157 6.1.3.3 Überprüfung eines asymmetrischen Transports ........................................................... 158 6.1.3.4 Zusammenfassung der Transportuntersuchungen in hCMEC/D3-Zellen ................. 159 6.2 Primäre Hirnkapillarendothelien der Ratte (rBCEC) ........................................................ 161 6.2.1 Die Modulation der Pgp-Funktionalität in rBCEC-Zellen ......................................................... 162 6.2.2 Transportuntersuchungen in rBCEC-Zellen .............................................................................. 165 6.2.2.1 Versuchsbedingungen ...................................................................................................... 165 6.2.2.2 Die Kokultur mit Astrozyten .............................................................................................. 166 6.2.2.3 Primärkulturen des Hirnkapillarendothels anderer Spezies ........................................ 168 6.2.2.4 Zusammenfassung der Transportuntersuchungen in rBCEC-Zellen ......................... 169 6.3 Schlussbetrachtung .............................................................................................................. 171 ZUSAMMENFASSUNG ............................................................................................................ 173 III
SUMMARY ........................................................................................................................... 176 7 LITERATURVERZEICHNIS ............................................................................................... 179 8 ANHANG ...................................................................................................................... 206 8.1 Reagenzien, Verbrauchsmaterialien und Geräte ............................................................. 206 8.2 Gewinnung primärer Rattenhirnkapillarendothelien ....................................................... 210 8.3 Gewinnung primärer Astrozyten der Ratte ....................................................................... 212 8.4 Durchführung eines Kumulations-Assays ........................................................................ 213 8.5 Durchführung eines Transport-Assays ............................................................................. 215 8.6 Durchführung eines Western Blots .................................................................................... 218 PUBLIKATIONEN ................................................................................................................... 221 DANKSAGUNG ..................................................................................................................... 223 IV
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7 LITERATURVERZEICHNIS ............................................................................................... 179<br />
8 ANHANG ...................................................................................................................... 206<br />
8.1 Reagenzien, Verbrauchsmaterialien und Geräte ............................................................. 206<br />
8.2 Gewinnung primärer Rattenhirnkapillarendothelien ....................................................... 210<br />
8.3 Gewinnung primärer Astrozyten der Ratte ....................................................................... 212<br />
8.4 Durchführung eines Kumulations-Assays ........................................................................ 213<br />
8.5 Durchführung eines Transport-Assays ............................................................................. 215<br />
8.6 Durchführung eines Western Blots .................................................................................... 218<br />
PUBLIKATIONEN ................................................................................................................... 221<br />
DANKSAGUNG ..................................................................................................................... 223<br />
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