TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

MATERIAL UND METHODEN
die Quantifizierung und den Vergleich der Substratkonzentrationen in beiden
Kammern und lassen Rückschlüsse auf den Transport einer Substanz zu.
Tabelle 4.2: Übersicht zu den Parametern verwendeter Membraneinsätze für die
Transportstudien.
Material
Polyester
Polycarbonat
Polyester
Format
Membrangrößtumsflächdichtkeit
der
Wachs-
Poren-
Sichtbar-
PorenØ
(µm)
(mm) (cm 2 )
(pro cm 2 ) Zellen
Transwell ®
(Corning Costar Corporation)
6Well 24 4,67 0,4 4x10 6 Sichtbar
12Well 12 1,12 0,4 4x10 6 Sichtbar
Schlecht
6Well 24 4,67 0,4 1x10 8 sichtbar
Schlecht
12Well 12 1,12 0,4 1x10 8 sichtbar
ThinCerts ®
(Greiner Bio-One)
Nicht
6Well 24,85 4,254 0,4 1x10 8 sichtbar
12Well 13,85 1,132 0,4 2x10 6 Sichtbar
Die Inserts wurden mindestens eine Stunde vor Aussaat der Zellen mit dem
jeweiligen Medium im Brutschrank inkubiert. Dabei wurden für das 6Well-Format 1,5
ml für die apikale und 2,5 ml Medium für die basolaterale Kammer verwendet. Inserts
im 12Well-Format wurden mit 0,5 ml apikal und 1,5 ml basolateral befüllt. Während
der gesamten Kultivierung wurden diese Volumina für die Inserts beibehalten. Die
Ablösung der Zellen wurde wie in Abschnitt 4.2.1 beschrieben vorgenommen. Die
Zellen wurden für die spätere Vergleichbarkeit vor der Aussaat ausgezählt. Die
Zellzählung erfolgte mit Hilfe einer Zählkammer nach Fuchs-Rosenthal. Diese weist
eine Zählfläche von 16 mm 2 und eine Tiefe von 0,2 mm auf. Die Zählfläche besteht
aus 16 Großquadraten, die sich jeweils aus 16 Kleinquadraten zusammensetzen. Es
wurde pro Probe ein Volumen von 200 µl ausgezählt. Dazu wurde eine Probe der
Zellsuspension 1:5 mit Medium und Trypanblau verdünnt, wobei stets 40 µl
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