TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

STAND DER FORSCHUNG
Dieser Umstand kann durch Inhibitoren verhindert werden. Ein Nachteil dieser
Methode ist die hohe Permeabilität kleiner lipophiler Substanzen, die mit diesem
Assay nicht erfasst werden können.
Mit den Transport-Assays ist es möglich herauszufinden, ob Substanzen
durch MDT transportiert werden (SCHWAB et al. 2003b). Dazu muss aber die
parazelluläre Diffusion vermieden bzw. ausgeschlossen werden, was durch
konfluente und dichte Zellmonolayer erreicht werden kann. Wie in der Abbildung 2.5
zu sehen ist, werden die Zellen in einem dreidimensionalen Transwell-Modell auf
einer semi-permeablen Membran kultiviert (GROBSTEIN 1953).
Abbildung 2.5: Modell des Transwell-Systems, nach LUNA-TORTÓS et al. (2008).
Das Transwell-System dient der Erkennung der Substrate von MDT. Die Zellen werden auf einer
feinporigen Membran des Kammereinsatzes kultiviert und bilden einen Monolayer mit engen
Verbindungen (Tight junctions) zwischen den Zellen aus. Medium wird in beide Kammern
eingefüllt. Aufgrund der Trennung der apikalen (blutzugewandt) und der basolateralen
(hirnseitig) Kammer, ist ein Durchtritt nur durch die Zellmembran möglich.
Diese Membran unterteilt das System in eine apikale und basolaterale
Kammer. Die Testsubstanz wird in eine der Kammern gegeben (bidirektionaler
Transport-Assay). Proben werden auf der jeweils anderen Seite entnommen. Bei
dieser Variante des Assays kann der Einfluss der passiven und parazellulären
Diffusion einer Substanz nicht ausgeschlossen werden, weshalb die Methode in der
hiesigen Arbeitsgruppe modifiziert wurde. Für den Konzentrationsgleichgewichts-
Assay (Concentration Equilibrium Assay, CETA) wird die Testsubstanz in der
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