TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

ANHANG
8.6 Durchführung eines Western Blots
Lösungen und Puffer
Sämtliche Lösungen wurden mit bidestilliertem Wasser angesetzt.
PBS (pH 7,3) Lysis-Puffer (pH 8,0)
Siehe Abschnitt 8.2 Siehe Abschnitt 8.4
5x Laemmli-Puffer
2 % (w/v) SDS
50 mM Tris, pH 6,8
0,2 mg/ml Bromphenol Blau
0,1 M DTT
10 % (v/v) Glycerol
Lagerung bei -20 °C
Transferpuffer
Elektrophoresepuffer
25 mM Tris 25 mM Tris
192 mM Glyzin 250 mM Glyzin
10 % Methanol 0,1 % (w/v) SDS
PBS mit Tween-20 (PBS-T)
Siehe Zusammensetzung PBS + 0,05 % Tween-20
Coomassie-Färbelösung
60-80 mg Coomassie Brillantblau R-250
35 mM HCl
A. bidest. ad 1000 ml
lichtgeschützte Lagerung bei 4 °C
Magermilchlösung
2 % bzw. 5 % Magermilchpulver (w/v) in PBS-T
Polyacrylamidgel
Sammelgel
Trenngel
4 % Acrylamid 10 % Acrylamid
0,5 M Tris (pH 6,8) 1,5 M Tris (pH 8,8)
0,1 % (w/v) SDS 0,1 % (w/v) SDS
0,1 % APS 0,1 % APS
0,1 % TEMED 0,1 % TEMED
Alle Schritte ab Herstellung der Proteinlysate fanden unsteril ohne die Verwendung der Sterilbank
statt.
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