TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

ZUSAMMENFASSUNG
Diese wurden im Transwell-Modell eingesetzt, um deren Eignung und Pgpspezifischen
Transport untersuchen zu können.
Die vorliegende Arbeit befasste sich mit der MDT-Hypothese, der damit
verbundenen Überexpression der MDT sowie der Etablierung einer humanen
Zelllinie als Transwell-Modell. Von besonderem Interesse war dabei das Pgp. Es ist
nicht hinreichend geklärt, wodurch eine verstärkte Funktion dieser Transporter bei
epileptischen Patienten ausgelöst wird. Ziel der Untersuchungen war es
herauszufinden, ob Antiepileptika die Funktionalität von Pgp induzieren. Dazu wurde
die humane Zelllinie hCMEC/D3 ausgewählt. Bei hCMEC/D3-Zellen handelt es sich
um immortalisierte Endothelzellen aus dem Temporallappen einer
pharmakoresistenten Epilepsiepatientin (WEKSLER et al. 2005). Die hCMEC/D3-
Zellen exprimieren für Endothelien typische Marker-proteine und werden für In-vitro-
Untersuchungen eingesetzt (WEKSLER et al. 2005; POLLER et al. 2008; CARL et al.
2010). In vorläufigen Studien wurden auch primäre Hirnkapillarendothelzellen der
Ratte eingesetzt.
Der Western Blot ermöglichte den Nachweis von Pgp sowohl in den
immortalisierten hCMEC/D3-, GPNT- und RBE4-Zellen als auch in den primären
Hirnendothelien der Ratte. Die funktionelle Untersuchung wurde mit Hilfe von
Kumulations-Assays mit dem Pgp-Substrat Rhodamin 123 durchgeführt. Dazu
wurden hCMEC/D3-, GPNT- und RBE4-Zellen mit den Antiepileptika Carbamazepin,
Levetiracetam, Phenobarbital, Phenytoin, Topiramat und Valproat behandelt. In den
Primärkulturen wurden Carbamazepin und Phenytoin untersucht. Die Behandlung
erstreckte sich i.d.R. über drei Tage. Im Kumulations-Assay konnte für alle Zelllinien
und den primären rBCEC-Zellen funktionelles Pgp nachgewiesen werden, dessen
Funktion durch bekannte Induktoren und den spezifischen Inhibitor Tariquidar
moduliert werden konnte. Dabei zeigten die hCMEC/D3-Zellen funktionelles Pgp,
welches sich trotz vergleichsweise geringer Expression nur schwer induzieren ließ.
Die Ergebnisse der Kumulations-Assays variierten in den Zellen der verschiedenen
Spezies. Die Funktionalität von Pgp wurde nicht von allen Antiepileptika in den
gewählten Konzentrationen beeinflusst. Das heißt, dass die getesteten Antiepileptika
nicht in allen Zellen induzierende Wirkungen hatten. Die robustesten Effekte in
hCMEC/D3-Zellen ließen sich mit Carbamazepin (100 µM) und Valproat (300 µM)
zeigen. In RBE4-Zellen induzierte Carbamazepin (50 µM) die Funktionalität Pgps. In
den Versuchen mit rBCEC-Zellen führten Carbamazepin und Phenytoin zu einer
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