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DISKUSSION
stets Hydrocortison zugefügt (siehe Mediumszusammensetzung S. 45), welches zur
Ausbildung von Tight junctions beiträgt (FÖRSTER et al. 2008) und damit ebenfalls
die Integrität der Monolayer fördert.
In der Literatur werden beispielsweise für primäre Hirnkapillarendothelzellen
der Ratte TEER-Werte bis zu 500 Ω*cm 2 beschrieben (PERRIÈRE et al. 2005). Die
hier gemessenen Werte der Hirnkapillarendothelzellen aus Ratten lagen mit einem
durchschnittlichen Widerstand von 168,1 Ω*cm 2 (auch in Kokultur mit Astrozyten)
weit unter diesem Wert. Die optimalen Bedingungen für die Erhöhung des TEER-
Werts und folglich der Integrität müssen also noch gefunden werden.
Wie die hCMEC/D3-Zellen zeigten die Primärkulturen ebenfalls sehr
unterschiedliche Ergebnisse nach Transport-Assays mit den Pgp-Substraten
Rhodamin 123, Digoxin und Verapamil (Abbildung 5.25). Ein asymmetrischer
Transport des Fluoreszenzfarbstoffs Rhodamin 123 war in primären Zellen beider
Rattenstämme nachweisbar (Abbildung 5.25, 5.27 & 5.28). Der Transport von
Digoxin und Verapamil konnte nicht detektiert werden. Es fiel aber auf, dass die
Rattenhirnendothelien im Gegensatz zu hCMEC/D3 auf Transwell-Inserts von
Greiner einen höheren Widerstand und auch niedrigere Mannitol-Permeabilitäten
zeigten, was auf eine bessere Integrität der Zellmonolayer schließen ließ. Dies hatte
aber keinen Einfluss auf den Nachweis eines Transports (Abbildung 5.28). Generell
zeigten die primären Rattenzellen höhere TEER-Werte als die humanen
immortalisierten Zellen. Bezüglich der Mannitol-Permeabilität ist zu sagen, dass für
die Primärkulturen aus der Ratte höhere Werte als für die humanen Zellen gemessen
wurden. Damit besteht möglicherweise das gleiche Problem wie für die hCMEC/D3-
Zellen. Eine zu hohe parazelluläre Permeabilität könnte einen Pgp-vermittelten
Transport überdeckt haben.
6.2.2.2 Die Kokultur mit Astrozyten
Es wurde bereits für die immortalisierten humanen Hirnendothelien
hCMEC/D3 beschrieben, dass die Kokultur von Endothelien mit Astrozyten die
Membraneigenschaften wesentlich beeinflussen und verbesserte Bedingungen für
Transportversuche schaffen kann (HATHERELL et al. 2011; siehe Abschnitt 5.1.4.7
S. 100 ff.). Für primäre Zellen des Hirnkapillarendothels konnte dies ebenfalls
nachgewiesen werden (CECCHELLI et al. 2007; NAKAGAWA et al. 2007). In
einzelnen Versuchen mit den rBCEC-Zellen konnten höhere TEER-Werte und
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