TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

DISKUSSION
al. 2010). Aus diesem Grund wurden mit diesen Zellen ebenfalls bidirektionale
Transportversuche durchgeführt, die aber keinen asymmetrischen Rhodamin-
Transport erkennen ließen und deshalb für weitere Transportuntersuchungen in
hCMEC/D3-Zellen nicht mehr durchgeführt wurden.
6.1.3.2 Die Kokultur mit Astrozyten
Die Kultivierungs- und Versuchsbedingungen wurden in Anlehnung an Quellen
in der Literatur (WEKSLER et al. 2005; POLLER et al. 2008; CARL et al. 2010)
gewählt. In zwei von 35 einzelnen Versuchen mit monokultivierten humanen Zellen
konnte ein asymmetrischer Transport des Fluoreszenzfarbstoffs Rhodamin 123
nachgewiesen werden (Abbildung 5.15). Es existieren viele Studien, in denen der
Einfluss der natürlichen Umgebung von Hirnkapillarendothelien untersucht wurde
(DEHOUCK et al. 1990; WOLBURG et al. 1994; CECCHELLI et al. 1999; GAILLARD
et al. 2000; ABBOTT 2002; DEMEUSE et al. 2002; HAWKINS et al. 2002; SCHIERA
et al. 2003; GARCIA et al. 2004; HAYASHI et al. 2004; NAKAGAWA et al. 2007;
WILLIS et al. 2007; HATHERELL et al. 2011). Dabei fiel auf, dass v.a. Astrozyten
einen entscheidenden Einfluss auf die Dichtigkeit und Undurchlässigkeit der
Endothelzellschicht und folglich auch der BHS haben. Die Astrozyten sezernieren
z.B. bestimmte Faktoren, die die Ausbildung der Tight junctions (CECCHELLI et al.
1999) und die Expression von MDT fördern (WILLIS et al. 2007). Mit der Kokultur der
Hirnkapillarendothelzellen und Astrozyten auf kleineren Membranen konnten das
Transwell-Modell und damit die Transportuntersuchungen für die Zelllinie hCMEC/D3
optimiert werden. Die Kokultivierung führte zu einer erneuten Steigerung des TEER-
Werts (Monokultur: 110,7 ± 36,2 Ω*cm 2 , Kokultur: 161,9 ± 3,5 Ω*cm 2 ; siehe Tabelle
5.4) sowie einer niedrigeren Mannitol-Permeabilität (Monokultur: 309,0 ± 115,0 nm/s,
Kokultur: 165,0 ± 37,5 nm/s; siehe Tabelle 5.4). Dies deutete auf dichtere Monolayer
hin. Ähnliche Effekte zeigten CUCULLO et al. (2008), die zumindest eine leichte
Steigerung des TEER durch die Kokultur mit Astrozyten nachwiesen. Die
Transportversuche zur Kokultur der hCMEC/D3-Zellen mit Astrozyten zeigten ein
einheitlicheres Bild, der Transport von Rhodamin 123 konnte festgestellt werden
(Abbildung 5.19 B & C).
157