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DISKUSSION
Nachweis eines asymmetrischen Rhodamin-Transports. Die Unterschiede des
Substratgehalts zwischen apikaler und basolateraler Kammer fielen für die
Membranen aus Polycarbonat aber deutlicher aus. Außerdem zeigten die
Zellmonolayer höhere TEER-Werte. Polycarbonat-Membranen schienen unter den
gewählten Bedingungen besser geeignet zu sein. Genauere Angaben dazu sind in
der Literatur nicht zu finden.
Untersuchungen des Formats der Membran-Inserts machten deutlich, dass
die Wachstumsfläche einen entscheidenden Einfluss auf die Integrität der
Zellmonolayer haben kann. Mit der Kultivierung der hCMEC/D3-Zellen auf kleineren
Membranen im 12Well-Format (Wachstumsfläche: 1,12 cm 2 ) zeigten die Monolayer
eine höhere Dichtigkeit, die durch etwa 4-fach höhere TEER-Werte und niedrigere
Mannitol-Permeabilitäten gekennzeichnet war. In den Untersuchungen von
CUCULLO et al. (2008) und POLLER et al. (2008) wurden ebenfalls die kleineren
Transwell-Inserts verwendet und die Dichtigkeit zumindest in CUCULLO et al. (2008)
durch Messungen des Widerstands überprüft. Die TEER-Werte fielen aber mit 60-80
Ω*cm 2 niedriger aus als in der vorliegenden Arbeit (138,6 ± 35,4 Ω*cm 2 ). Mannitol-
Permeabilitäten wurden nicht bestimmt. Allerdings untersuchten POLLER et al.
(2008) die Permeabilitäten von Sucrose, die Werte von 15,8 nm/s zeigten. CARL et
al. (2010) zeigten Mannitol-Permeabilitäten von 24,7 nm/s in hCMEC/D3-Zellen.
Damit sind diese Permeabilitäten im Durchschnitt etwa 10- bis 100-mal niedriger als
die hier beschriebenen Daten (siehe Tabelle 5.4, S. 107). Ein asymmetrischer
Transport von Rhodamin 123 konnte in diesen Zellen trotz der hohen Permeabilitäten
und den vergleichsweise niedrigen TEER-Werten in einzelnen Versuchen der
vorliegenden Arbeit nachgewiesen werden.
Die Widerstände der Monolayer auf größeren Membran-Inserts (6Well), die für
einen direkten Vergleich mit monokultivierten hCMEC/D3-Zellen untersucht wurden,
fielen niedriger aus (29,6 vs. 119 Ω*cm 2 , Abbildung 5.19 A & B). Dies korrelierte mit
den Ergebnissen der Transport-Assays. Ein asymmetrischer Transport von Digoxin
und Verapamil konnte nicht, der Transport von Rhodamin 123 lediglich in zwei
Versuchen nachgewiesen werden. Ähnlich niedrige TEER-Werte wurden auch den
Untersuchungen von WEKSLER et al. (2005) gemessen. Allerdings muss hier
hinzugefügt werden, dass die Messung der Widerstände für die 12Well-
Membraneinlagen in der vorliegenden Arbeit aufgrund des Formats mit der
Messpinzette vorgenommen wurde (siehe Abschnitt 4.3.2) und diese Werte
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