TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

DISKUSSION
1 %/h für die Permeabilität von Mannitol nicht überschritten werden und der TEER
Werte von mindestens 100 Ω*cm 2 aufweisen (nach LUNA-TORTÓS et al. 2008). In
Transportstudien von Antiepileptika durch Pgp wurden derartige Werte in LLC- und
MDCK II-Zellen gemessen (LUNA-TORTÓS et al. 2008 & 2009). In hCMEC/D3-
Zellen wurden in Monokultur bzw. Kokultur mit Astrozyten bislang nur relativ geringe
TEER-Werte gemessen (< 40 bzw. 63 Ω*cm 2 ) (WEKSLER et al. 2005; HATHERELL
et al. 2011). Die Mannitol-Permeabilität wurde nur von CARL et al. (2010) untersucht
und zeigte Werte von 24,7 ± 0,2 nm/s.
Die Untersuchungen der Einflüsse durch das im Medium enthaltende Serum,
durch verschiedene Membraneinlagen und –formate im Transwell-System und die
Kokultur mit Astrozyten zeigten, dass alle genannten Faktoren sich in einem
bestimmten Ausmaß auf den Nachweis des Transports auswirken. Dies wird in den
folgenden Abschnitten beschrieben.
Material und Format der Membraneinlagen
Aufgrund von Lieferproblemen wurde der Herstellungsprozess der bisher
verwendeten Polyester-Membranen der Firma Corning geändert. Der Transport
gängiger Pgp-Substrate war nach dieser Umstellung aufgrund der Absorption der
Substanzen durch die Membranen in Nierenepithelzellen (LLC und MDCK II) nicht
mehr bzw. nur noch teilweise nachweisbar (K. Römermann, unveröffentlichte Daten).
Deshalb wurden in der vorliegenden Arbeit auch Membraneinlagen anderer Firmen
(Greiner Bio-One und Millipore) getestet, aber die Dichtigkeit der Zellmembran war
aufgrund einer anderen Porendichte der Membran-Inserts mit der des bisherigen
Herstellers Corning nicht vergleichbar (siehe Tabelle 4.2 S. 54). Auffällig war, dass
die Membran-Inserts des Herstellers Corning stets höhere TEER-Werte aufwiesen.
Diese scheinbar höhere Integrität der Monolayer hatte aber keinen Einfluss auf den
Nachweis eines asymmetrischen Transports. In Transportstudien mit hCMEC/D3-
Zellen werden auch Corning-Membraneinlagen verwendet (CUCULLO et al. 2008;
POLLER et al. 2008; JOICE et al. 2009; CARL et al. 2010), wobei die TEER-Werte
zwischen 30 und 80 Ω*cm 2 lagen. Ähnlich niedrige Widerstände wurden auch in den
hier beschriebenen Versuchen gemessen (17,9-65 Ω*cm 2 , Abbildung 5.13, 5.16, 5.17
B, 5.18 B & C und 5.19 A).
Die Polyester-Membranen, die üblicherweise in der hiesigen Arbeitsgruppe für
Transportversuche verwendet werden, führten in einzelnen Versuchen zu einem
153