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DISKUSSION
(2008) ein konzentrationsabhängiger Transport in Caco-2- und MDCK II-Zellen
nachgewiesen wurde. Möglicherweise wurde ein Transport von Verapamil und
Digoxin durch die hohe parazelluläre Permeabilität der humanen Zellen überdeckt,
was die Problematik dieser immortalisierten Endothelzellen als Transwell-Modell
bestätigen würde. Allerdings wird von ACHARYA et al. (2008) angenommen, dass
Digoxin neben Pgp von einem anderen noch nicht weiter beschriebenen Transporter
in MDCK II-Zellen transportiert wird. Sofern dieser Transporter nicht in allen Zellen zu
finden ist, könnte auf diese Weise erklärt werden, warum der Transport von Digoxin
in hCMEC/D3-Zellen nicht nachgewiesen werden konnte. Allerdings weisen die recht
niedrigen TEER-Werte und v.a. die hohen Mannitol-Permeabilitäten darauf hin, dass
aufgrund der unzureichenden Integrität der parazelluläre Transport von Digoxin und
Verapamil wesentlich höher war als ein Pgp-vermittelter Transport dieser
Substanzen.
In allen Versuchen, in denen ein asymmetrischer Transport in den in dieser
Arbeit beschriebenen Versuchen festzustellen war, handelte es sich um die Substanz
Rhodamin 123, die ebenfalls ein Pgp-Substrat darstellt (EFFERTH et al. 1989; LEE
et al. 1994; WEKSLER et al. 2005; TAI et al. 2009) und für Transportexperimente mit
diesen Zellen geeignet erschien. Die Vermutung, dass Rhodamin 123 auch von
BCRP transportiert wird, konnte von ROBEY et al. (2001) und in Studien im hiesigen
Labor (K. Römermann, unveröffentlichte Daten) nicht bestätigt werden.
Einflüsse auf den Widerstand und die Permeabilität
Dichte Zellmonolayer sind für Transport-Assays unerlässlich. Die Dichtigkeit
der Monolayer wurde zum einen durch den transendothelialen elektrischen
Widerstand, zum anderen durch die parazelluläre Permeabilität der Substanz
Mannitol bestimmt. Wenn ein Zellmonolayer nicht ausreichend dicht ist, kann
Mannitol zwischen den Zellen parazellulär diffundieren. Dies würde auch für andere
Substanzen, dessen Transport untersucht werden soll, gelten. Das heißt, dass ein
hoher transendothelialer elektrischer Widerstand der Zellmonolayer sowie eine
niedrige Permeabilität des parazellulären Markers Mannitol Voraussetzungen für
Transportuntersuchungen sind (LUNA-TORTÓS et al. 2008; HELMS et al. 2010).
CLAUDE et al. (1978) zeigten z.B., dass die Anzahl der Tight junctions mit dem
transendothelialen Widerstand korreliert. Deshalb wurden für alle Transport-Assays
Messungen beider Parameter durchgeführt. Dabei sollten Werte von 12 nm/s bzw.
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