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DISKUSSION
1994; WEKSLER et al. 2005; TAI et al. 2009). Einige Studien vermuten, dass ein
Efflux von Rhodamin 123 auch in BCRP-exprimierenden Zellen stattfindet, aber
Untersuchungen im hiesigen Labor an BCRP-transfizierten MDCK II-Zellen (K.
Römermann, unveröffentlichte Daten) und ROBEY et al. (2001) konnten keinen
BCRP-vermittelten Rhodamin-Efflux nachweisen.
Die Kumulations-Assays mit Rhodamin 123 führten zum Nachweis
funktionellen Pgps in hCMEC/D3-Zellen, welches durch bekannte Induktoren und
den Pgp-Inhibitor Tariquidar beeinflusst werden konnte. Zudem variierten die
Ergebnisse der Kumulations-Assays nicht so stark und ließen folglich auf robustere
Daten als mit dem Pgp-Substrat Digoxin schließen. Außerdem war es möglich,
modulierende Effekte nach der Behandlung mit Antiepileptika zu detektieren.
Rhodamin 123 war unter den gewählten Versuchsbedingungen ein geeignetes
Substrat, um Modulationen der Pgp-Funktionalität zu untersuchen.
In ersten Versuchen wurde der Einfluss des Serums sowie weiterer
Mediumszusätze auf den Efflux deutlich. Nach dem Protokoll von P.-O. Couraud
werden die hCMEC/D3-Zellen mit standardisiertem bovinem Serum kultiviert.
Aufgrund der hier durchgeführten Versuche und Vergleiche (Abbildung 5.4) wurde für
die Kumulationsexperimente nicht-standardisiertes Serum verwendet.
6.1.2.2 Bekannte Pgp-Induktoren
Um das Ausmaß einer Induktion durch Antiepileptika in hCMEC/D3-Zellen
abschätzen zu können, wurden geeignete Kontrollen benötigt. Diese sollten in den
Kumulationsversuchen sicherstellen, dass die Pgp-Funktionalität auch beeinflusst
werden konnte sowie Informationen über die Empfindlichkeit dieses Assays geben.
Dazu wurden bekannte Pgp-Induktoren eingesetzt, das Glukokortikoid
Dexamethason, die Zytostatika Doxorubicin, Puromycin, Rifampicin und Vincristin
(FARDEL et al. 1997; RÉGINA et al. 1999; DEMEUSE et al. 2004) und der
Neurotransmitter Glutamat. Die Zellen wurden mit diesen sechs Substanzen und
dem bekannten Pgp-Inhibitor Tariquidar behandelt. Mit Ausnahme des Inhibitors
erfolgte die Behandlung dabei i.d.R. über 3 Tage mit Beginn am 3. Tag nach
Erreichen der Konfluenz. Die gewählten Bedingungen für den Kumulations-Assay
waren für bekannte Pgp-Induktoren sensitiv genug, um Pgp-Induktionen nachweisen
zu können. Allerdings waren die Effekte dieser Induktoren sehr unbeständig. So
führte beispielsweise Dexamethason, welches einen bekannten Induktor für Pgp
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