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DISKUSSION
Hirnkapillarendothelzelllinie (RBE4), war es möglich zu zeigen, dass die
Antiepileptika Carbamazepin, Phenytoin und Topiramat die Funktionalität Pgps
induzieren und das Substrat im Vergleich zu unbehandelten Zellen vermehrt aus den
Zellen heraustransportiert wurde (NEUMANN 2010, Diplomarbeit). Für
weiterführende Untersuchungen zu diesem Thema wurde die humane
Hirnkapillarendothelzelllinie hCMEC/D3 herangezogen. Darüber hinaus wurden
vergleichende Untersuchungen mit den Rattenhirnendothelien GPNT und RBE4
durchgeführt. Die Auswahl der Substanzen und ihrer Konzentrationen wurde
erweitert.
6.1.2.1 Optimierung der Versuchsbedingungen
Die Zellen wurden dazu zunächst unter Berücksichtigung verschiedener
Parameter wie z.B. Kultivierungsbedingungen und Auswahl des Substrats
untersucht. Bereits frühere Versuche mit den Rattenhirnendothelien GPNT und
RBE4 zeigten sehr variable Ergebnisse der Kumulationsversuche, die mit dem von
der FDA empfohlenen Pgp-Substrat Digoxin durchgeführt wurden (NEUMANN 2010,
Diplomarbeit). Dieses Substrat, das für Transportversuche in Nierenzellen empfohlen
wird, schien für funktionelle Untersuchungen in diesen Zelllinien nicht geeignet. Der
unter Abbildung 5.3 dargestellte Versuch mit den hCMEC/D3-Zellen zeigte, dass der
Inhibitor Tariquidar nicht zu einer Hemmung des Efflux von Digoxin führte. Dies ließ
darauf schließen, dass Digoxin für Experimente, die die Funktionalität in den
humanen Zellen untersuchen, wie auch in den RBE4- und GPNT-Zellen ungeeignet
war. Digoxin ist ein spezifisches Pgp-Substrat (BECKER & DREWE 2006; siehe
Tabelle 2.1), dennoch könnte eine zu geringe Permeationsgeschwindigkeit dieser
Substanz durch die Membranen ursächlich dafür sein, dass eine Inhibition des Efflux
in der Kürze der Versuchsdauer nicht festzustellen ist. ACHARYA et al. (2008) gehen
nach Transportstudien mit MDCK II-Zellen (aus der Niere des Hundes) davon aus,
dass Digoxin nicht allein von Pgp sondern zusätzlich von einem weiteren Transporter
transportiert wird, der basolateral lokalisiert ist. Dieser noch nicht näher beschriebene
Transporter ist nicht in allen Zellen zu finden, sodass man folglich den nicht
messbaren Transport bzw. Efflux von Digoxin mit dem Fehlen des basolateralen
Transporters erklären könnte. Um Modulationen der Funktion des MDTs Pgp durch
Substanzen in hCMEC/D3-Zellen untersuchen zu können, wurde ein anderes
bekanntes Pgp-Substrat verwendet, Rhodamin 123 (EFFERTH et al. 1989; LEE et al.
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