TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

DISKUSSION
6.1 Die humane immortalisierte Hirnkapillarendothelzelllinie
hCMEC/D3
6.1.1 Pgp-Expression in hCMEC/D3-Zellen
Mit Hilfe des Western Blots konnte in dieser Arbeit ebenfalls nachgewiesen
werden, dass die hCMEC/D3-Zellen Pgp exprimieren. GPNT-Zellen zeigen im
Gegensatz zu RBE4-Zellen eine höhere Pgp-Expression (ROUX & COURAUD
2005). Dies konnte mit dem vergleichenden Western Blot bestätigt werden. Die
humanen Zellen zeigten eine moderate Pgp-Expression, die etwas höher war als die
der RBE4-Zellen, aber signifikant niedriger als in den GPNT-Zellen (Abbildung 5.2).
Diese großen Unterschiede der Pgp-Expression waren auch in der
Funktionalität von Pgp wiederzufinden. Der stärkste Rhodamin-Efflux wurde in
GPNT-Zellen gemessen, der niedrigste in RBE4. Die humanen Zellen lagen wie mit
ihrer Pgp-Expression dazwischen (Abbildung 5.4). Demnach ist die Funktionalität der
GPNT-Zellen durch Induktoren wie Dexamethason nicht weiter zu steigern, was in
dem unter Abbildung 5.4 C dargestellten Versuch bestätigt wurde. In den humanen
und die RBE4-Zellen führte Dexamethason zu einer Induktion des Rhodamin-Efflux,
was auf die niedrigere Pgp-Expression zurückgeführt werden kann. Aufgrund der
Pgp-Expression und der Induktion des Efflux durch Dexamethason erschienen die
hCMEC/D3-Zellen für Untersuchungen der modulatorischen Wirkungen durch
Antiepileptika geeignet.
6.1.2 Die Modulation der Pgp-Funktionalität
Der Kumulations-Assay erlaubt die Untersuchung der Funktionalität von
Transportern. In dieser Arbeit war der MDT Pgp von großer Bedeutung. Die Basis
der vorliegenden Arbeit bildeten die Untersuchungen von AMBROZIAK et al. (2010),
die die Induktion durch Antiepileptika in MDCK II-Zellen (Epithel der Hundeniere) und
in der Rattenhirnendothelzelllinie GPNT untersuchten. Sie verwendeten das von der
FDA empfohlene Pgp-Substrat Digoxin und fanden keine induzierenden Effekte nach
der Behandlung mit den Antiepileptika Carbamazepin, Phenobarbital und Phenytoin.
Nach Anpassung des Versuchsprotokolls an ein anderes Substrat (Rhodamin 123
statt Digoxin) und der Kultivierung der GPNT-Zellen (Puromycin wurde nur während
der zwei Passagen dem Medium zugefügt) sowie der Verwendung einer weiteren
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