TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

ERGEBNISSE
5.2.2.6 Zusammenfassung des Transports in primären Hirnendothelien der
Ratte
Die Untersuchung des Transports in primären Rattenhirnendothelien zeigte,
dass in diesen Zellen auch ohne starke Modifizierungen des Transwell-Modells
Transport nachgewiesen werden konnte. Der Nachweis des Rhodamin-Transports
gelang sowohl in monokultivierten als auch in mit Astrozyten kokultivierten Zellen und
auf verschiedenen 12Well-Membraneinlagen (Corning und Greiner). Wie auch für die
hCMEC/D3-Zellen konnte ein Transport der spezifischen Pgp-Substrate Digoxin und
Verapamil für die Primärkultur nicht detektiert werden (Abbildung 5.25). Keines der
getesteten Substrate wurde von Zellen, die auf größeren 6Well-Membranen kultiviert
wurden, transportiert (Abbildung 5.26).
Die Parameter für die Integrität der Monolayer, der TEER und die Mannitol-
Permeabilität, wurden auch für diese Zellen untersucht. Die Widerstände zeigten für
die Primärkulturen in den meisten Versuchen höhere Werte als die immortalisierten
hCMEC/D3-Zellen (rBCEC: 6Well: 97,5 ± 24,8 Ω*cm 2 und 12Well: 168,1 ± 37,6
Ω*cm 2 ; hCMEC/D3: 6Well: 31,9 ± 12,8 Ω*cm 2 und 12Well: 138,6 ± 35,4 Ω*cm 2 )
(siehe Tabellen 5.4 & 5.6). Für die Primärkulturen fiel zudem auf, dass die Zellen auf
Greiner-Membraneinlagen oft etwas höhere transendotheliale elektrische
Widerstände zeigten als auf Corning-Inserts. Dies schien aber keinen Einfluss auf
den Nachweis eines Transports haben. Die Mannitol-Permeabilitäten zeigten ähnlich
hohe Werte auf den 12Well-Membraneinlagen wie die humanen Zellen (rBCEC:
239,2 ± 72,0 nm/s; hCMEC/D3: 230,4 ± 109,2 nm/s). Permeabilitäten < 12 nm/s
wurden nicht gemessen.
Die Kokultur mit Astrozyten führte zu keiner offensichtlichen Verbesserung der
Parameter für die Dichtigkeit und dem Nachweis des Transports. So konnte der
TEER durch die Kokultur (Monokultur: 165,4 ± 36,5 Ω*cm 2 ; Kokultur: 174,1 ± 39,5
Ω*cm 2 ; siehe Tabelle 5.6) nicht wesentlich gesteigert werden, die Mannitol-
Permeabilität blieb ebenfalls nahezu unverändert (Monokultur: 246,6 ± 67,8 nm/s;
Kokultur: 222,8 ± 78,0 nm/s). Weiterhin wurde die Spezifität des Rhodamin-
Transports überprüft. Dieser konnte durch die Pgp-Inhibitoren Tariquidar und
Valspodar in den genannten Konzentrationen nicht vollständig gehemmt werden
(Abbildung 5.29).
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