TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

% Rhodamin 123
% Rhodamin 123
ERGEBNISSE
G
Rhodamin 123 (2 µM), Kokultur
rBCEC P:1 (CD) + Astrozyten P:7
n=5
H
+ PSC833 (10 µM)
rBCEC P:1 (CD) + Astrozyten P:7
n=1
Veränderung
der AUC/h
180
160
140
* * *
*
180
160
140
- 6,3 %
120
120
100
AUC/h: 463 TEER: 229,0 *cm 2
0 60 120 180 240
min
100
AUC/h: 434 TEER: 197,9 *cm 2
0 60 120 180 240
min
Abbildung 5.29: Transport-Assays (CETA) mit 2 µM Rhodamin 123 in rBCEC-Zellen der
Rattenstämme CD und Wistar in Monokultur (A & B) und Kokultur mit Astrozyten der Ratte (C–
H). Der Transport wurde über einen Zeitraum von 4 h beobachtet. Die Zellen wurden auf 12Well-
Membraneinlagen der Firmen Greiner (A, B, G & H) und Corning (C-F) kultiviert. Die
Experimente wurden 4-7 Tage nach Erreichen der Konfluenz durchgeführt. Die Graphen A, C, E
und G zeigen Versuche, in denen nur Konzentrationsveränderungen des Substrats Rhodamin
123 gemessen wurden. Unter B, D, F und H sind Transport-Assays dargestellt, die die Inhibition
des Transports durch Tariquidar (TQD) und Valspodar (PSC833) untersuchten.
In allen Versuchen erfolgte der Nachweis eines asymmetrischen Rhodamin-Transports. Die
Inkubation mit den Inhibitoren Tariquidar und Valspodar zeigte keine oder nur wenige
Veränderungen im Konzentrationsverlauf des Substrats. Der Rhodamin-Transport konnte nicht
inhibiert werden. Die Messung der Mannitol-Permeabilität ergab Werte für A und B mit 153,7
nm/s, C und D: 319 m/s, E und F: 214,3 nm/s und für G und H: 142,1 nm/s.
Die Werte sind als Mittelwerte ± SEM angegeben. Signifikante Unterschiede wurden mit einer
Two-way ANOVA (Posthoc Bonferroni) ermittelt und sind mit Sternen (p < 0,05) angezeigt.
Die hier dargestellten Graphen zu Transportexperimenten (Abbildung 5.29) mit
Primärkulturen des Rattenhirnendothels zeigen, dass der Rhodamin-Transport
mittels der spezifischen Pgp-Inhibitoren Tariquidar und Valspodar nicht gehemmt
werden konnte (Graph B, F & H). Die Inhibition durch Tariquidar in Graph D schien
erst nach etwa 120 min einzutreten. Für den letzten Probenzeitpunkt waren keine
signifikanten Konzentrationsunterschiede mehr feststellbar und die AUC sank um
52,2 %. Allerdings konnte dies nicht reproduziert werden. Bei den Graphen B und H
könnten ähnliche Effekte wie für D vermutet werden, da auch hier die
Konzentrationsunterschiede zum letzten Zeitpunkt abnahmen. Konkrete Angaben
können aber dazu nicht gemacht werden, da für die unter B, F und H dargestellten
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