TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

ERGEBNISSE
zusätzlicher Konzentrationen, um die Wirkung von Antiepileptika in den
Primärkulturen abzuklären.
5.2.3 Pgp-Funktionalität in rBCEC-Zellen: Transport-Assays
Das Hauptaugenmerk für die primären Hirnendothelzellen der Ratte lag auf
den Transportversuchen. Es sollte geklärt werden, wie sich Primärkulturen im
Transwell-Modell verhalten und ob diese möglicherweise besser als In-vitro-BHS-
Modell geeignet sind als die immortalisierten humanen hCMEC/D3-Zellen. Des
Weiteren sollte im Hinblick auf mögliche Unterschiede zwischen den Spezies
Mensch und Ratte untersucht werden, ob und welche Antiepileptika Substrate des
MDTs Pgp in diesen Zellen sind. Zu diesem Zweck wurden die Zellen auf
Membraneinlagen kultiviert. In der Regel wurden dazu Membran-Inserts im 12Well-
Format verwendet, weil auf diese Weise mit den Zellen einer Präparation zum einen
eine höhere Anzahl an Wells in den Versuchen erzielt wurde. Zum anderen konnten
mehr Faktoren wie Substrate, Inhibitoren, Dichtigkeit der Zellmonolayer usw.
untersucht werden. In einzelnen Transport-Assays wurden auch 6Well-
Membraneinlagen verwendet, um beide Formate miteinander vergleichen zu können.
Hinweise zur Wachstumsfläche, Porendichte und –größe können der Tabelle 4.2 (S.
54) entnommen werden.
Die Primärkulturen der Hirnendothelzellen der Ratte wurden nur für
Transportversuche nach der Konzentrationsgleichgewichtsmethode eingesetzt. Wie
auch für die hCMEC/D3-Zellen wurden verschiedene Parameter wie Substrat,
Format und Hersteller der Membraneinlagen sowie die Kokultur mit Astrozyten
untersucht.
In der Tabelle 5.7 wurden alle untersuchten Parameter zusammengefasst.
5.2.3.1 Auswahl des Substrats
Bei den Transportversuchen mit den hCMEC/D3-Zellen schien der
Fluoreszenzfarbstoff Rhodamin 123 als Pgp-Substrat besser geeignet zu sein.
Infolgedessen wurden in ersten Experimenten Rhodamin 123 eingesetzt. Dabei
wurde die gleiche Konzentration (2 µM) wie bei den humanen immortalisierten Zellen
verwendet. Um zu klären, ob weitere Pgp-Substrate wie Digoxin und Verapamil
durch Pgp in rBCEC transportiert werden, wurden diese ebenfalls untersucht.
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