TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

Rhodamin 123
(Fluoreszenz/mg Protein)
Rhodamin 123
(Fluoreszenz/mg Protein)
ERGEBNISSE
A
200000
150000
rBCEC P:1 (Wistar)
n=6
*
B
200000
150000
rBCEC P:1 (CD)
n=3
*
100000
100000
50000
0
Kontrolle
TQD 0,5 µM
50000
0
Kontrolle
Dex 10 µM
*
Puro 1 µM
TQD 0,5 µM
Abb. 5.23: Kumulations-Assays in primären Hirnendothelzellen der Ratte (Wistar und CD). Die
Aussaat der Zellen erfolgte auf Multiwell-Platten im 12Well-Format.
Der Multidrug-Transporter Pgp war in diesen Primärzellen funktionell. Der Vergleich beider
Stämme zeigte, dass Pgp in Zellen der Wistar-Ratten zu einem stärkeren Efflux des Substrats
Rhodamin 123 führte.
A: Der Pgp-Inhibitor Tariquidar führte zu einer Hemmung des Efflux von Rhodamin 123 aus den
Zellen.
B: Die Zellen wurden über einen Behandlungszeitraum von drei Tagen mit den Pgp-Induktoren
Dexamethason und Puromycin behandelt. Puromycin (1 µM) induzierte die Pgp-Funktionalität,
der Gehalt an Rhodamin 123 verringerte sich im Vergleich zu den nicht behandelten
Kontrollzellen. Dexamethason (10 µM) zeigte keinen Einfluss auf den Efflux durch Pgp.
Tariquidar inhibierte Pgp und führte zu einer signifikant höheren Substratkonzentration in den
Zellen.
Die Daten sind als Mittelwerte + SEM angezeigt. Signifikante Unterschiede wurden mit dem
Student’s t-Test ermittelt und sind mit Sternen (p < 0,05) angezeigt.
Abkürzungen: Dex: Dexamethason, Puro: Puromycin, TQD: Tariquidar.
Die Kumulationsversuche zeigten, dass in den Primärzellen der Ratte beider
Stämme funktionelles Pgp vorhanden war, welches durch Inhibitoren und Induktoren
beeinflusst werden konnte. In exemplarischen Experimenten wurden deshalb die
Antiepileptika Carbamazepin und Phenytoin bezüglich ihrer Wirkung auf Pgp
untersucht. Die Konzentrationen von jeweils 100 µM wurden gewählt, weil diese in
hCMEC/D3-Zellen zur Induktion des Pgp-Efflux führten bzw. Tendenzen zu einer
induzierenden Wirkung nachgewiesen wurden (Abbildung 5.8 B, C & D und 5.9).
116