TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

Pgp-Epression
(%; normiert auf ß-Aktin)
ERGEBNISSE
A
B
Pgp-Expression in rBCEC-Zellen
60 *
50
40
30
20
10
0
Passage 1 Passage 3
Abbildung 5.22: Ergebnis eines Western Blots mit primären Rattenhirnendothelzellen des
Stamms Wistar. Die Expression wurde in zwei verschiedenen Passagen der Zellen untersucht
und entsprechend graphisch dargestellt. Pro Passage wurde je 1 Probe 3-mal aufgetragen und
die Pgp-Expression auf die des Housekeepers ß-Aktin normiert. In beiden Passagen der
rBCEC-Zellen wurde die Pgp-Expression nachgewiesen. Zellen der Passage 3 exprimierten
signifikant weniger Pgp.
Die quantifizierten Signale der Proteine Pgp und ß-Aktin (siehe A) wurden als Mittelwerte +
SEM angegeben. Signifikante Unterschiede wurden mit dem Student’s t-Test ermittelt und sind
mit Sternen gekennzeichnet (p < 0,05).
5.2.2 Pgp-Funktionalität in rBCEC-Zellen: Kumulations-Assays
Mit dem Kumulations-Assay wurde in rBCEC-Zellen die Funktionalität des
MDTs Pgp untersucht. Dies sollte auch für diese Zellen klären, ob Antiepileptika zu
einer Induktion der Pgp-Funktionalität führen. Für diese Experimente wurden Zellen
der Passagen 1 und 2 verwendet. Dazu wurden die Zellen mit den Pgp-Induktoren
Dexamethason und Puromycin sowie mit ausgewählten Antiepileptika behandelt. Die
Behandlung mit den Substanzen erfolgte hier ebenfalls ab dem 3. Tag nach
Erreichen der Konfluenz für 72 h. Das Medium mit der jeweiligen Substanz wurde
täglich erneuert. Tariquidar, welches als Pgp-Inhibitor diente, wurde erst mit
Versuchsbeginnn einer vorher unbehandelten Gruppe an Zellen hinzugefügt und
lediglich über 3 h auf diesen belassen. Für die Kumulationsversuche wurde als
Substrat Rhodamin 123 in der Konzentration von 2 µM eingesetzt.
115