TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

ERGEBNISSE
5.2 Primärkulturen des Hirnendothels der Ratte (rBCEC)
Die immortalisierte Zelllinie hCMEC/D3 wurde im Hinblick auf ihre Eignung als
BHS-Modell untersucht. Aufgrund möglicher Veränderungen dieser Zellen durch die
fehlende natürliche Umgebung zu anderen Zelltypen wie z.B. Astrozyten und
Perizyten, den Immortalisierungsprozess und der unzureichenden Dichtigkeit des
Monolayers, wurden zum Vergleich Zellen des Hirnkapillarendothels zweier
Rattenstämme (CD ® -IGS und Wistar) präpariert und Primärkulturen hergestellt. Die
CD ® -IGS-Ratten werden im Weiteren nur mit der Abkürzung CD bezeichnet. Diese
wurden vorrangig in Transport-Assays eingesetzt. Die Funktionalität des MDT Pgp
wurde aber auch in einzelnen Kumulationsversuchen untersucht.
Es wurden zwei Rattenstämme für die Präparation verwendet, um anhand
möglicher Unterschiede bei der Präparation, Kultivierung und der im Weiteren
beschriebenen Versuche den geeigneteren Stamm für Primärkulturen und die
Fragestellung finden zu können.
5.2.1 Pgp-Expression in rBCEC-Zellen: Western Blot
Die Pgp-Expression in den primären Rattenhirnendothelzellen aus Wistar-
Ratten wurde in zwei unterschiedlichen Passagen untersucht, Passage 1 und 3. Die
Pgp-Signale der Zellen wurden ebenfalls auf den Housekeeper ß-Aktin normiert.
Primärkulturen können nicht beliebig oft passagiert werden, da sie im Laufe
der Kultivierungsdauer ihre typischen Eigenschaften wie z.B. die Expression von
Transportern verlieren können. Deshalb wurden die rBCEC-Zellen nur mit den
Passagen 1 und 2 in Kumulations- und Transportversuchen eingesetzt. Der Western
Blot, der die Pgp-Expression in den Passagen 1 und 3 untersuchte, zeigte, dass die
Expression von Pgp in der höheren Passage der primären Hirnendothelzellen um
etwa die Hälfte reduziert war.
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