TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

ERGEBNISSE
5.1.4.10 Zusammenfassung der Transportuntersuchungen in hCMEC/D3-Zellen
Für die Untersuchung des Transports in hCMEC/D3-Zellen wurden viele
verschiedene Parameter untersucht und modifiziert. Es wurde deutlich, dass ein
asymmetrischer Transport der radioaktiv markierten Substanzen Digoxin und
Verapamil nicht detektierbar war. Der Fluoreszenzfarbstoff Rhodamin 123 hingegen
wurde aktiv von Pgp von der basolateralen in die apikale Kammer transportiert.
Die Ergebnisse für die monokultivierten hCMEC/D3-Zellen waren aber
inkonsistent. Lediglich in zwei von 35 einzelnen Versuchen nach der
Konzentrationsgleichgewichtsmethode konnte der Transport von Rhodamin 123 auf
6Well-Membranen der Firma Greiner nachgewiesen werden, obwohl die Zellen auf
Corning-Membranen höhere transendotheliale Widerstände zeigten (Corning: 41,7 ±
8,2 Ω*cm 2 ; Greiner: 19,3 ± 2,7 Ω*cm 2 ). Die Kultivierung der humanen Zellen auf
kleineren Inserts (12Well-Format; Hersteller: Corning) führte zu einem Anstieg des
TEER, der mit einer höheren Mannitol-Permeabilität einherging (6Well: TEER: 31,9 ±
12,8 Ω*cm 2 und P app(Mannitol) : 90,2 ± 35,9 nm/s; 12Well: TEER: 138,6 ± 35,4 Ω*cm 2
und P app(Mannitol) : 230,4 ± 109,2 nm/s).
Mit der Kokultivierung der Endothelzellen mit Astrozyten ließ sich der TEER
nochmals steigern (Monokultur: 110,7 ± 36,2 Ω*cm 2 vs. Kokultur 161,9 ± 3,5 Ω*cm 2 )
und die Mannitol-Permeabilität sank (Monokultur: 309,0 ± 115,0 Ω*cm 2 vs. Kokultur:
165,0 ± 37,5 nm/s). Ein asymmetrischer Transport von Rhodamin 123 konnte
detektiert werden. Dabei wurden die größten Konzentrationsunterschiede zwischen
der apikalen und basolateralen Kammer für Membraneinlagen aus Polycarbonat
(Corning) festgestellt. Die Mannitol-Permeabilitäten lagen stets weit über der
festgelegten Grenze von 12 nm/s (nach LUNA-TORTÓS et al. 2008), unabhängig
vom Material der Membran-Inserts und vom Serum waren die Werte durchschnittlich
für das 6Well-Format etwa 8-mal und für das 12Well-Format ca. 18-mal höher als der
Grenzwert (siehe Tabelle 5.4). Deshalb muss man davon ausgehen, dass die
Monolayer der hCMEC/D3-Zellen keine ausreichende Integrität aufwiesen und
demzufolge der Transport von Antiepileptika nicht untersucht wurde.
Der asymmetrische Rhodamin-Transport konnte mit den Pgp-Inhibitoren
Valspodar und Tariquidar nur in einem von insgesamt acht durchgeführten
Versuchen mit Inhibitoren vollständig gehemmt werden (Abbildung 5.21 F). Die AUC
verringerte sich im Vergleich ohne Inhibitor um über 50 %.
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