TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

% Digoxin
% Digoxin
ERGEBNISSE
A
Digoxin (10 nM), Monokultur
hCMEC/D3 P:30
n=3
B
Digoxin (10 nM), Kokultur
hCMEC/D3 P:4 + Astrozyten P:15
n=3
150
125
apical
basolateral
150
125
100
100
75
TEER: 127,4 *cm 2
50
0 60 120 180 240
min
75
TEER: 159,8 *cm 2
50
0 60 120 180 240
min
Abbildung 5.20: Transport-Assays (CETA) mit 10 nM Digoxin in mono- und kokultivierten
hCMEC/D3-Zellen. Die Zellen wurden auf Membraneinlagen (Corning) im 12Well-Format
kultiviert und am 7. Tag nach Erreichen der Konfluenz für den Transportversuch eingesetzt.
Konzentrationsveränderungen wurden über einen Zeitraum von 4 h beobachtet. Die TEER-
Werte waren im Vergleich zu denen monokultivierter hCMEC/D3-Zellen höher. Die Mannitol-
Permeabilität lag bei einem Wert von 366 nm/s für die monokultivierten Zellen, für die Kokultur
lag diese bei 191 nm/s. Ein Transport von Digoxin konnte nicht gezeigt werden. Die Daten sind
als Mittelwerte ± SEM angegeben.
Die Steigerung des TEER durch die Kultivierung der humanen
Hirnkapillarendothelien auf kleineren Membran-Inserts und deren Kokultur mit
Astrozyten konnte mit diesem Transportversuch bestätigt werden. Ein Transport von
Digoxin wurde nicht nachgewiesen.
5.1.4.8 Überprüfung des Transports durch Pgp
Der Transport von Rhodamin 123 konnte in kokultivierten und teilweise in
monokultivierten hCMEC/D3-Zellen nachgewiesen werden. Ob dieser Transport
spezifisch war und auf die Funktionalität von Pgp zurückzuführen war, wurde mit
spezifischen Pgp-Inhibitoren wie zum Beispiel Valspodar (PSC833) und Tariquidar
überprüft. Die Zellen wurden dazu zeitgleich mit dem Substrat Rhodamin 123 und
dem Inhibitor inkubiert. Wenn die Konzentrationsveränderungen in den Kammern
des Transwell-Systems durch spezifischen Transport von Pgp hervorgerufen wurden,
sollte der Transport durch die Inhibitoren gehemmt werden. Die nachfolgende
Abbildung zeigt beispielhafte Versuche, in denen der Transport von Rhodamin
festgestellt wurde und Inhibitoren zur Überprüfung des Transports mitgeführt wurden.
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