TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

% Rhodamin 123
% Rhodamin 123
ERGEBNISSE
Zusammensetzungen der getesteten Medien sind im Anhang (siehe S. 215)
aufgeführt.
A
+ 1 nM Simvastatin
hCMEC/D3 P:37
n=5
B
- Simvastatin
hCMEC/D3 P:30
n=5
150
125
apikal
basolateral
150
125
100
100
75
TEER: 17,9 *cm 2
50
0 60 120 180 240 300 360
min
75
TEER: 40,2 *cm 2
50
0 60 120 180 240 300 360
min
Abbildung 5.16: Untersuchung des Transports von Rhodamin 123 (2 µM) in Abhängigkeit der
Substanz Simvastatin. Der Transport wurde über 6 h auf Corning-Membranen im 6Well-Format
beobachtet. Die Zellen wurden am 6. Tag nach Erreichen der Konfluenz für den Versuch
verwendet. Die Monolayer, die Simvastatin vor dem Versuchen erhielten, zeigten eine Mannitol-
Permeabilität von 98 nm/s. Ohne Simvastatin lag die Permeabilität bei 75 nm/s. Die Zellen, die
kein Simvastatin erhielten, zeigten 2-mal höhere Widerstände. Ein Transport von Rhodamin 123
war nicht nachweisbar. Die Werte sind als Mittelwerte ± SEM angegeben.
Die verschieden hohen Konzentrationen an Rhodamin 123 in beiden Kammern (B) wurden
nicht gekennzeichnet, weil die basolaterale Konzentration höher als die in der apikalen
Kammer war. Aus diesem Grund wurde nicht von einem Transport durch Pgp ausgegangen.
Ein Faktor, der ebenfalls Einfluss auf den Nachweis eines Transports haben
kann, ist das Versuchsmedium. Dazu wurde zunächst das Versuchsmedium Opti-
MEM ® getestet, welches weder Serum noch Wachstumsfaktoren enthielt. Dieses
Medium wird in Transportversuchen mit anderen Zelllinien in der hiesigen
Arbeitsgruppe standardmäßig eingesetzt. Ein Transport von Digoxin und Rhodamin
123 in hCMEC/D3-Zellen konnte aber mit dem Medium Opti-MEM ® nicht
nachgewiesen werden.
Weiterhin wurde der sogenannte HBSS-Puffer für Transport-Assays
verwendet (nach CARL et al. 2010). Diesem Puffer wurde kein Serum, sondern
lediglich 1 mM Natriumpyruvat als Energiequelle und 10 mM HEPES als
Puffersubstanz (u.a. Gewährleistung der Aufrechterhaltung der Enzymstrukturen und
95