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Abb. 17: Western-Blot von Zelllysaten der Pankreastumor-Zelllinien mit anti-GAPDH-Kaninchenantikörper
und anti-CalgranulinA/B-Mausantikörper sowie HRP-konjugierten anti-Maus IgG bzw. anti-Kaninchen IgG
Antikörpern. Größenstandard: Spectra Multicolor Broad Range Protein Ladder (nicht alle Markerbanden
dargestellt). C1/2 = CAPAN-1/-2, H3/4 = HUP-T3/-T4, P02 = PaTu8902, PS = PaTu8988-S, PT = PaTu8988-T,
DAN = DAN-G, YA = YAPC. n = 1 Versuch.
Abb. 17 zeigt die Ergebnisse der Entwicklung zweier Blotstreifen. Im Blot konnte in allen 9
Zelllinien eine in etwa gleich starke Bande zwischen 34 und 42 kDa detektiert werden. Dieses
stellt die Proteinfraktion des 37 kDa großen GAPDH dar. Gleiche Ergebnisse wurden bei
Proteinauftrag auf 14% Laemmli Gele erzielt 14 . Bei Herstellung der Zelllysate ist es also nicht
zu einer wesentlichen Proteindegradation gekommen und die Beladung der SDS-Gele erfolgte
relativ gleichmäßig. Bei Verwendung des anti-CalgranulinA/B Antikörpers wurde bei
CAPAN-1 eine starke Bande zwischen der 10 und 17 kDa Markerbande, in etwa bei13 kDa,
detektiert. Nach längerer Belichtungszeit der Röntgenfilme zeigte sich eine schwache Bande
auf exakt gleicher Höhe im HUP-T4 Zelllysat (Abb. 17). Bei dieser Bande handelt es sich um
das 13kDa große S100A9 oder Calgranulin B des Calprotectin-Komplexes. Die
Blotinkubation mit den anderen Antikörpern erbrachte keine positiven Resultate. Es konnten
bei anderen Zelllinien keine im Western-Blot detektierbaren Mengen an S100A8/A9 oder
Reg3A Protein nachgewiesen werden.
Die Ergebnisse der Analyse von Zelllysaten decken sich mit den Ergebnissen der
Immunfluoreszenzmarkierung der Kulturlinien CAPAN-1 und HUP-T4.
14 Daten nicht gezeigt
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