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Abb. 16: Immunfluoreszenzmarkierung von CAPAN-1 (A, B) und HUP-T4 (C, C‘) Pankreaskarzinomzellinien
mit einem Maus anti-Calgranulin A/B (27E10 SantaCruz) Antikörper und einem AlexaFluor488 konjugierten
anti-Maus IgG Antikörper. DNA in den Zellkernen mit DAPI blau gefärbt. A-C‘ Olympus U-Plan FI 100x/1.30
Öl Objektiv. n = 1 Versuch.
5.3 Ergebnisse der qualitativen Proteindetektion von Zelllysaten der
Pankreastumorzelllinien durch SDS-PAGE und Western-Blot
Die 9 Pankreastumorzelllinien wurden jeweils bis zur maximalen Bewachsdichte der
Zellkulturschalen kultiviert, mit Lysepuffer inkubiert und von den Zellkulturschalen gekratzt.
Im Bradford-Test wurde die Proteinkonzentration bestimmt und eine äquivalente
Proteinmenge auf 14% Laemmli beziehungsweise 16% Schägger-Gele aufgetragen, durch
Elektrophorese aufgetrennt und anschließend im Blot auf Nitrozellulosemembran übertragen.
Zur Kontrolle der Lysatherstellung und der gleichmäßigen Beladung der Gele wurde die
Nitrozellulosemembran mit einem anti-GAPDH Antikörper inkubiert. Die Blot-Membranen
der 14%-Laemmli Gele wurden mit anti-Reg3A-P0841202 Antikörpern und anti- RegIIIα/γ
(H-69) inkubiert. Wegen einer differenzierteren Auftrennung der S100A8/A9 Proteine
wurden hier 16% Schägger-Gele verwendet und die entsprechenden Blot-Membranen mit
anit-S100A9 P0301501 Antikörper sowie mit anti-Calgranulin A/B (27E10), anti-Calgranulin
A (E10) und anti-Calgranulin B (MRP 1H9) Antikörper inkubiert.
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