Tierärztliche Hochschule Hannover - TiHo Bibliothek elib

eines entdifferenzierten Adenokarzinoms konnte S100A9 in Zytoplasma-Ausstülpungen von
neoplastischen Zellen nachgewiesen werden.
Die Auswertung von fluoreszenzmarkierten Pankreasgewebeproben erbrachte vor allem in
physiologischem Pankreas und bei chronischer Pankreatitis neue Ergebnisse. Bezüglich der
Expression, Synthese und Sekretion von Reg3A und S100A9 durch neoplastische Zellen
selbst kommt die Immunfluoreszenzmarkierung dieser Gewebeproben an die Grenzen der
Auswertung. Ob die detektierten Proteine von anderen als den Tumorzellen selbst stammten
und sich nur sekundär an Sekrete und Zelloberflächen angelagert hatten, konnte nicht geklärt
werden. Aufgrund dessen war es naheliegend, Adenokarzinomzellen in der Zellkultur zu
kultivieren und die Zellen selbst in der Immunfluoreszenz und deren Zelllysate mittels
Western-Blot auf das Vorhandensein von Reg3A und S100A9 Proteinen zu untersuchen.
5.2.4 Ergebnis der Immunfluoreszenzmarkierung von Reg3A und S100A8/A9 in
Pankreaskarzinomzelllinien
9 Zelllinien von Pankreaskarzinomen, gewonnen aus Primärtumoren, Metastasen oder Aszites
wurden in Kultur genommen und solange kultiviert bis ein einheitliches gleichmäßiges
Kulturwachstum gewährleistet war. Dann wurden die Zellen auf Deckgläschen ausgesät, über
Nacht kultiviert und anschließend formalinfixiert. Anschließend wurden
Immunfluoreszenzmarkierungen durchgeführt. Dabei wurden anti-Reg3A P0841202
Hühnerantikörper und ein polyklonaler Kaninchenantikörper gegen humanes RegIIIα/γ (H-
69) eingesetzt. Für die Detektion von S100A9 wurden anti-S100A9 P0301501
Hühnerantikörper und ein monoklonaler Mausantikörper gegen humanes Calgranulin A/B
(27E10) verwendet.
In keiner der 9 Pankreaskarzinomzelllinien konnte Reg3A nachgewiesen werden. Weder mit
dem anti-Reg3A P0841202 Hühnerantikörper noch mit dem anti- RegIIIα/γ (H-69) Antiköper
konnten spezifische Fluoreszenzsignale detektiert werden.
In zwei Zelllinien unterschiedlichen Ursprungs konnte mit dem Calgranulin A/B (27E10)
Antikörper jeweils in einer Subpopulation der kultivierten Zellen zytoplasmatisch S100A8/A9
nachgewiesen werden. Bei beiden Zelllinien handelte es sich nicht um eine aus dem
Primärtumor stammende Linie. S100A8/A9 konnte in CAPAN-1 nachgewiesen werden (Abb.
16 A, B), eine Zelllinie die aus einer Lebermetastase gewonnen wurde. Bei HUP-T4 handelt
es sich um eine aus Aszites gewonnene Zelllinie (Abb. 16C, C‘). Die Abbildung zeigt, dass
nur wenige Zellen einer Zelllinie S100A8/A9 Protein exprimieren.
Das Ergebnis wurde jetzt mittels Western-Blot Analyse von Zelllysaten der Zelllinien
überprüft.
85