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Abb. 12: A-C‘ Chronische Pankreatitis. Vergleich von Präimmunseren der anti-Reg3A P0841202 (B) sowie
anti-S100A9 P0301501 (B‘) Hühnerantikörper mit Antikörperseren nach der Immunisierung. A, A‘ Inkubation
ohne primäre Antikörper mit AlexaFluor488 konjugiertem anti-Hühner IgY Antikörper, Belichtungszeit 1000ms.
B, B‘ Immunfluoreszenz mit P0841202 Prae-Immunserum (B) und P0301501 Prae-Immunserum (B‘) und
sekundärem AlexaFluor488 konjugiertem anti-Hühner IgY Antikörper, Belichtungszeit 500ms. C, C‘
Immunfluoreszenz-Markierung mit P0841202 sowie P0301501 Antikörpern, C Zymogengranula in Azinuszellen
markiert, C‘ b = myeloider S100A9-positiver Leukozyt, Belichtungszeit 500ms. a = Sekret im Lumen eines
Pankreasausführungsgangs, A-C‘ Olympus PlanN 40x/0.65 Objektiv. n = 2 unabhängige Versuche.
In diesem Versuch (Abb. 12 B, B‘) wurden daher die Präimmunseren 5-fach konzentrierter
eingesetzt (1:100) als die Hühnerantikörper (Abb. 12 C, C‘). Es wurde eine Gewebeprobe
ausgewählt, von der aus vorhergehenden Versuchen bekannt war, dass vorhanden
Gangsysteme reichlich Sekret enthielt (chronische Pankreatitis). Es wurden identische,
verlängerte Belichtungszeiten verwendet (B, C, B‘, C‘ 500ms). Beide Präimmunseren zeigen
unter diesen Bedingungen im Vergleich zur Negativkontrolle eine geringgradige diffuse
Fluoreszenz von Azinusbereichen, Pankreasgangepithelien und Sekreten (Abb. 12 B, B‘),
welche allerdings in keinem Vergleich zur spezifischen Fluoreszenzmarkierung von
Zymogengranula (C) beziehungsweise myeloider Leukozyten (C‘) stand. Diese diffuse
Fluoreszenz konnte keiner definierten Struktur zugeordnet werden. Die spezifische
Fluoreszenzmarkierung stellte sich um ein vielfaches intensiver dar. Schleim und Sekret im
Pankreasgang zeigte bei keinem der beiden getesteten Präimmunseren unspezifische
Fluoreszenzsignale.
Dieser Versuch zeigt, dass die in Abb. 10 und Abb. 11 dargestellten
Fluoreszenzmarkierungen von Sekreten im Pankreasausführungsgang und in muzinösen
Drüsen nicht die Folge einer unspezifischen Bindung des primären Antikörper sein können.
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