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Wie bereits in Abb. 6 gezeigt, wird die Autofluoreszenz der Azini im DAPI Filter Satz in
diesem Versuch um 80% reduziert, im Rahmen anderer Versuche wurde bei Azinusbereichen
eine Reduktion zwischen 65% (DAPI) und 95,6% (FITC) erreicht (Tab. 2).
Tab. 2 zeigt, dass die Kombination von Sudan Schwarz mit anderen Methoden bei
Pankreasgewebeproben keinen vorteilhaften Summationseffekt bezüglich der Unterdrückung
der Eigenfluoreszenz aufweist.
Versuchsansatz Behandlung DAPI Filter FITC Filter Cy3 Filter
% Autofluoreszenz von Azinusbereichen ausgehend von unbehandelten Gewebeschnitten
Toluidin Blau ohne Behandlung 100,00 % 100,00 % 100,00 %
Toluidin Blau Färbung 128,80 % 32,1 % 147,3 %
Sudan Schwarz +
38,2 % 21,6 % 166,5 %
Toluidin Blau Färbung
Sudan Schwarz Färbung 32,0 % 5,1 % 21,6 %
Kupfersulfat ohne Behandlung 100,00 % 100,00 % 100,00 %
100mM Kupfersulfat 54,9 % 30,1 % 40,5 %
Sudan Schwarz Färbung 34,3 % 14,2 % 19,0 %
UV-Bestrahlung ohne Behandlung 100,00 % 100,00 % 100,00 %
UV-Bestrahlung 85,6 % 60,5 % 58,3 %
Sudan Schwarz Färbung 27,4 % 23,5 % 21,0 %
Tab. 2 Autofluoreszenzreduktion bei verschiedenen Behandlungsmethoden
Letztlich wurde Sudan Schwarz bei unterschiedlichen Pankreaspräparaten des Menschen und
der Ratte in Kombination mit verschieden primären und sekundären Antikörper verwendet,
ohne dass eine Beeinträchtigung der Fluoreszenzmarkierung wahrgenommen werden konnte
(Abb. 10, Abb. 11). Die Optimierungen des Färbeprozesses, vor allem die verlängerte
Inkubationszeit, aber auch eine verbesserte Löslichkeit des Farbstoffes in 70% Isopropanol,
eine geringere Farbstoffkonzentration in der Lösung 8 sowie ein Zentrifugieren und Filtern der
Farblösung vor Gebrauch führten zur Reduktion von Sudan Schwarz Präzipitaten auf den
8 In dieser Arbeit wurde standardmäßig 0,25% Sudan Schwarz (G/V) verwendet
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