Tierärztliche Hochschule Hannover - TiHo Bibliothek elib
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Bedingungen die Antikörperketten nicht aufgetrennt werden (Abb. 3 A). Es ist nur eine<br />
Antikörperbande am oberen Gelrand (180 kDa Gesamt-IgY) erkennbar. Eine Überlagerung<br />
der Banden der Antikörperketten mit den Banden von den S100A8/A9-Komplexen ist in<br />
diesem Versuch daher unwahrscheinlich. Unter reduzierenden Bedingungen ergeben die<br />
leichten Ketten des IgY im Western-Blot Banden zwischen 22 und 35 kDa, die schweren<br />
Ketten zwischen 67 und 70 kDa (Abb. 3 A‘).<br />
Antikörper und S100A9 Protein konnten mit 5 M Kaliumacetat-, 2 M Imidazol-, 4 und 11 M<br />
Harnstoff-Puffer eluiert und im Western-Blot nachgewiesen werden (Abb. 3 D, F). Antikörper<br />
ohne S100A9 Protein wurden mit 0,1 M Glycin-, 1 M Arginin-, 4 M MgCl-, und 0,2 M<br />
Ethanolamin- Puffer eluiert (Abb. 3 A/A‘, C, E, G).<br />
Abb. 3: Elution von S100A9 welches von P0301501-Antikörpern, die an Matrixkügelchen gebunden wurden,<br />
aus dem Blutplasma präzipitiert wurde. Die Eluate wurden auf 16% Schägger-Gele aufgetragen und mittels<br />
SDS-PAGE aufgetrennt. Anschließend wurden die Proteine im Western-Blot auf Zellulosemembranen<br />
übertragen. Zur Proteindetektion wurde der P0301501-Hühnerantikörper verwendet und die Protein-<br />
Antikörperbindung mit einem HRP-konjugierten anti-Huhn-IgY Sekundärantikörper sichtbar gemacht. A/A’ =<br />
Glycinpuffer; B/B’ = Matrixkügelchen; C = Ethanolaminpuffer, D = Harnstoffpuffer; E = Glycinpuffer; F =<br />
Imidazolpuffer; G = Argininpuffer; H = Filter aus Mobicol. Größenstandard: Fermentas Spectra Broad Range<br />
Marker. ß-Merc = ß-Mercarptoethanol. n = 2 unabhängigeVersuche.<br />
Der Versuch zeigt, dass natives S100A9 Protein sowie S100A8/A9 Proteinkomplex durch den<br />
P0301501 anti-S100A9-Antikörper erkannt werden.<br />
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