Tierärztliche Hochschule Hannover - TiHo Bibliothek elib

5. Ergebnisse
Im Folgenden werden die Ergebnisse der bereits beschriebenen, aufeinander aufbauenden
Versuche in der Reihenfolge aufgeführt, in der sie im Labor durchgeführt wurden. Zusätzlich
zu den Ergebnissen der Fluoreszenzmarkierung von Gewebeproben sind immer auch die
histologischen Bilder kurz beschrieben und in H/E-Färbung in der Abbildung dargestellt. Am
Anfang jedes Ergebnisabschnitts wird darauf eingegangen, warum der Versuch durchgeführt
wurde, und am Ende jedes Abschnitts wird angegeben, ob das tatsächliche Ergebnis dem
Erwarteten entsprach.
5.1 Antikörper
5.1.1 Ergebnis der Antikörperpräparation
Um den S100A8/A9 Proteinkomplex und Reg3A Protein im Western-Blot, in
Pankreastumorzelllinien und in humanen Pankreasneoplasien durch Immunomarkierung
nachzuweisen, wurden Hühner mit ausgewählten Peptidsequenzen dieser Proteine
immunisiert und die Antikörper anschließend mittels Chloroformfällung aus den Eiern
präpariert. Die Überstände und das entstandene Antiserum wurden auf 8% SDS-PAGE Gele
aufgetragen. Das Ergebnis ist am Beispiel des S100A9-Antiserums in Abb. 1 dargestellt.
Abb. 1: Coomassie-Sensitiv-Färbung zur Kontrolle der S100A9 Antiserumherstellung aus Ei-Präparation
P0301501 durch Auftrag der Überstände und Pellets des jeweiligen Arbeitsschrittes auf 8% SDS-PAGE Gele
unter reduzierenden (mit β–Mercaptoethanol) und nicht reduzierenden Bedingungen. T = Ei/ PBS-Gemisch; Ü1/
P1 = Überstand/ Pellet nach erster Zentrifugation mit Chloroform; Ü2/P2 = Überstand/ Pellet nach zweiter
Zentrifugation mit Chloroform; Ü3/P3 = Überstand/ Pellet nach PEG-Fällung. Größenstandard: Fermentas
PageRuler unstained protein ladder. n = 1 Versuch.
60