Tierärztliche Hochschule Hannover - TiHo Bibliothek elib

Zur Detektion von CRP, CA 19-9 und CEA kann je nach Testsystem und Hersteller Serum
oder Plasma verwendet werden. Hier wurden standardmäßig alle Proteine in EDTA-Plasma
detektiert. EDTA-Plasma ist leicht gelblich-klar. Proben die durch rötliche Verfärbung auf
Hämolyse, Gerinnung oder nicht ausreichende Trennung von Blutzellen und Plasma
hindeuteten wurden verworfen. Bei Patienten mit Pankreaserkrankungen ist durch einen
eventuellen Verschluss des gemeinsamen Pankreas- und Gallengangs eine Gelbverfärbung
des Plasmas durch Bilirubin, oder eine durch einen sekundären Diabetes mellitus bedingte
Weißgrautrübung des Plasmas durch Triglyzeride oft nicht zu vermeiden. Obwohl selbst bei
starker Probenverdünnung eine Beeinflussung photometrischer Messverfahren durch das
intensiv färbende Bilirubin denkbar war, sind bei besonderer Kontrolle dieser Proben keine
ungewöhnlich veränderten Proteinkonzentrationen aufgetreten.
4.8.3 Qualitative Bestimmung von S100A9 und Reg3A Protein durch Hühnerantiköper
im peripheren Blut durch Western-Blot
Dieser Versuch diente zur Detektion von S100A8/A9 und Reg3A Proteinen mittels Western-
Blot im Blutplasma. Es sollte eruiert werden, ob die selbst hergestellten Hühnerantikörper
P0301501 und P0841202 die Proteine im Blutplasma detektieren können. Es wurden 2
Versuchsansätze durchgeführt. Für die Detektion von S100A8/A9 wurde eine Probe eines
Probanden mit chronischer Pankreatitis ausgewählt, die im ELISA-Test einen hohen
Proteinwert aufgewiesen hatte. Entsprechend wurde für die Detektion von Reg3A eine Probe
ausgewählt, die im ELISA-Test einen maximal hohen Reg3A Wert zeigte. Von beiden Proben
wurden 2µl Blutplasma mit 15ml PBS und 5 µl 4-fach Laemmli-Auftragspuffer mit ß-
Mercaptoethanol auf 8% / 13% Laemmli-Stufengele aufgetragen. Die Stufengele wurden
verwendet um große Mengen von humanem Serumalbumin mit einem Molekulargewicht von
ca. 65 kDa im oberen Teil des Gels abzufangen und zwischen 10 und 20 kDa große
Zielproteine im untern 13% Acrylamid haltigen Teil des Gels gut erkennen und klassifizieren
zu können. Proteine kleiner als 50 kDa befanden sich im unteren Teil des Gels. Die
Übertragung auf Nitrozellulosemembranen und der anschließende Immunoblot fanden wie in
den entsprechenden Kapiteln beschrieben statt. Die Hühnerantikörper wurden 1:15000
verdünnt eingesetzt.
4.8.4 Bestimmung von CEA, CA19-9 und CRP
Die Bestimmung von CEA, CA19-9 und CRP im EDTA-Plasma fand im Zentrallabor des St.
Josef-Hospital, Universitätsklinikum der Ruhr-Universität Bochum, statt. CA19-9 und CEA
wurden mit Elecsys ® / COBAS ® Analysegeräten und mit Tests-Kits der Firma Roche
Diagnostics GmbH vermessen. Das Testsystem basiert auf der Markierung der Zielproteine
durch monoklonale Antikörper und dem Sichtbarmachen der Antigen-Antikörperkomplexe
mittels Elektrochemilumineszenz. Das CR-Protein wurde turbidimetrisch mit Test-Kits
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